DIVERSIDAD DE LAS PLATAFORMAS TN7 PORTADORAS DE INTEGRONES DE CLASE 2

ÁLVAREZ, VERÓNICA; QUIROGA, MARIA PAULA; CARRERA PAEZ, LAURA; CENTRÓN, DANIELA; MASSO, MARIANA; GALÁN, ANGÉLICA

Buenos Aires

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología (CAM) - 2019; 2019

Asociación Argentina de Microbiología

Introducción: Los transposones Tn7 y sus derivados Tn7-like son reservorio de múltiples resistencias a antibióticos en bacterias debido a que algunos portan integrones de clase 2 (IC2). La transferencia horizontal genética (THG) juega un rol principal en la dispersión de los IC2. En el presente trabajo investigamos las plataformas genéticas de los transposones Tn7 y Tn7-like que diseminan IC2. Materiales y Métodos: Examinamos los transposones Tn7 depositados en GenBank que portaban IC2 y que poseían el módulo de transposición tnsABCDE completo. Clasificamos en alelos a los genes intI2, y tnsABCD a partir de alineamientos múltiples (Clustal) y determinamos las combinaciones que originaron las plataformas genéticas existentes. Concatenamos los genes tnsABCD y utilizamos la herramienta MEGA para la reconstrucción filogenética mediante el algoritmo de Máxima Verosimilitud. La prueba de filogenia fue mediante el método de bootstrap con 1000 réplicas. En aquellas plataformas invadidas por secuencias de inserción (IS), reconstruimos el alelo primitivo y posteriormente lo concatenamos de igual forma que el resto de las secuencias.Resultados: Agrupamos las plataformas en 14 categorías de transposones Tn7 (n=735) y 10 alelos intI2 (n=98). La variabilidad del módulo tnsABCDE estuvo dada principalmente por mutaciones en tnsD, que codifica para una proteína reguladora de la transposición. Tres categorías de Tn7 mostraron mutaciones que afectan la funcionalidad respecto del Tn7 canónico. Observamos 2 plataformas Tn7 que se diseminan actualmente, las de variantes TnsABCD_6 y TnsABCD_3, con genes intI2 no funcionales y representan el 9384% de los registros. El TnsABCD_6 (64%) se encontró en Shigella spp. (38,3%), E. coli (19,1%), Proteus mirabilis (10,6%), Acinetobacter baumannii (8,5%), Providencia spp. (6,4%), Enterobacter cloacae (4,3%), Morganella morganii (4,3%), Oblitimonas alkaliphila (4,3%) y Pseudomonas aeruginosa (4,3%). En contraste, TNSABCD_3 se encontró alojado en Klebsiella pneumoniae exclusivamente (20XX%). Las zonas variables (ZV) de los IC2 llevan predominantemente el arreglo de genes cassette típico dfrA1-sat2-aadA1-orfX, aunque también observamos catB3-blaOXA-1-aacA4-oOrfX; dfrA1-ltrA (intrón del grupo II); blaIMP-27-sat1-spcR-orfX ; y ZV con genes cassettes no identificados o gcu. Encontramos plataformas invadidas por IS3, IS4-like, IS5 e IS630. Finalmente, en cuanto al sitio de inserción del transposón Tn7, observamos preponderancia de la inserción cromosómica en el sitio attTn7. Conclusión: El estudio evolutivo mostró que las plataformas Tn7 de los clados más recientes llevan el arreglo canónico de tnsABCDE y portan variantes IntI2 no funcionales, aunque detectamos clados basales con IntI2 funcionales embebidas en Tn7-like. Esto indica que la dispersión de los IC2 embebidos en Tn7 se dio principalmente a partir de un ancestro común que portaba un IC2 con una integrasa IntI2 no funcional, sin embargo aunque los mecanismos precisos de la THG aún no se conocen completamente.