Nueva proteína recombinante con potencial para el diagnóstico de histoplasmosis

TOSCANINI MA; NUSBLAT AD; IOVANNITTI CA; GONZÁLEZ MAGLIO D; CUESTAS ML

CABA

Congreso; VII Congreso de Enfermedades Endemoepidémicas del Hospital de Infecciosas Francisco J. Muñiz; 2019

Hospital de Infecciosas Francisco J. Muñiz

Introducción:La histoplasmosis es una micosis sistémica endémica ampliamente distribuida en América causada por el hongo dimórfico Histoplasma capsulatum. Los pacientes inmunocomprometidos pueden contraer la forma diseminada de la enfermedad, la cual tiene mal pronóstico y requiere diagnóstico y tratamiento rápidos. Pocos antígenos se utilizan para el inmunodiagnóstico de histoplasmosis, las glicoproteínas H y M, el galactomanano y un antígeno polisacárido. El uso de los antígenos H y M para la detección de anticuerpos está limitado por su baja sensibilidad y especificidad, particularmente, en inmunocomprometidos, y además los métodos actuales para su producción requieren mucho tiempo y son problemáticos. Además, el único ELISA de detección de antígeno de histoplasma aprobado en Argentina no está disponible en todos los hospitales y resulta muy costoso.Por lo tanto, existe la necesidad de buscar nuevos candidatos antigénicos para el diagnóstico de histoplasmosis. Por ello, se propuso la proteína Hcp100 de H. capsulatum como un nuevo blanco para diagnóstico y tratamiento de histoplasmosis debido a su rol esencial en la adaptación y supervivencia del hongo dentro de los macrófagos durante la infecciónObjetivos:Expresar de forma recombinante y purificar Hcp100 y evaluar su potencial para el desarrollo de métodos diagnósticos de histoplasmosisMateriales y Métodos:El gen de Hcp100 se construyó con una señal secretora y una etiqueta de polihistidina y se expresó en Pichia pastoris. La purificación de Hcp100 a partir de un sobrenadante de cultivo de 24h se llevó a cabo utilizando una columna de cromatografía de afinidad Ni-NTA y los eluatos se analizaron por SDS-PAGE y Westernblot. La inmunorreactividad de Hcp100 se analizó por inmunodifusión con un suero de un paciente con histoplasmosis diseminada y un suero humano normal (SHN). La Hcp100 recombinante purificada se utilizó para inocular ratones BALB/c y obtener anticuerpos policlonales cuya especificidad fue evaluada por dotblot usando Hcp100, histoplasmina, coccidioidina y paracoccidioidina como antígenosResultados:Hcp100 fue expresada con éxito de forma recombinante a escala del mg y purificada al 90%. Hcp100 demostró ser inmunorreactiva por inmunodifusión contra un suero de un paciente con histoplasmosis diseminada sin mostrar reacción con el SHN. Se obtuvieron anticuerpos policlonales de ratón específicos anti-Hcp100 los cuales no mostraron reacciones cruzadas con coccidioidina y paracoccidioidina.Conclusiones:El nuevo antígeno recombinante Hcp100 demostró tener un gran potencial para ser usado en el desarrollo de herramientas diagnósticas de histoplasmosis