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Rol del pigmento estafiloxantina en la fotoinactivación de Staphylococcus aureusRocío Diaz1, Andrea Lombarte Serrat1, Daniel Saenz2, Gustavo Calvo2, Mauricio Suligoy1, Daniel Sordelli1, Adriana Casas2 y Fernanda Buzzola1.1 Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica, UBA-CONICET. 2CIPYP, Hospital de Clínicas José de San Martín, CONICET, UBA.Introduccion: Patógenos bacterianos pueden ser inactivados fotodinámicamente. Para ello, se requiere de moléculas fotosensibilizantes que al ser activadas por la luz visible generen especies reactivas del oxígeno ?principalmente oxígeno singlete- que dañan la célula bacteriana de forma irreversible. Staphylococcus aureus debe su nombre a la expresión del pigmento estafiloxantina (STX), un terpenoide que está unido a la membrana cuya estructura molecular permite especular que podría actuar como un fotosensibilizante endógeno frente a la irradiación (luz visible). La STX también podría proteger a S. aureus de la fotoinactivación bacteriana debido a su actividad antioxidante.Objetivo: estudiar la respuesta de S. aureus mediada por la STX frente a la inactivación fotodinámica en presencia o ausencia del fotosensibilizante azul de toluidina (AT). Materiales y Métodos: Se utilizaron las cepas isogénicas SH1000 y RN6390 y los aislamientos clínicos Sa14 y Sa14P de S. aureus. Las extracciones del pigmento a partir de suspensiones bacterianas con igual densidad óptica se realizaron con metanol y se cuantificaron espectrofotométricamente a 450 nm (DO450). Para la fotoinactivación bacteriana se irradiaron las bacterias con luz blanca no coherente durante 60 min luego de la incubación en oscuridad con 50 µM de AT. La eficiencia del tratamiento se determinó mediante el recuento de las UFC/ml. En ausencia de bacterias, se cuantificó fluorométricamente la generación de oxígeno singlete producido al iluminar la solución con AT en presencia o ausencia del extracto de STX.Resultados: En las suspensiones de S. aureus con igual DO600 se cuantificaron espectrofotométricamente los niveles de STX: SH1000 (0.4680.045), RN6390 (0.1640.096), Sa14 (0.2050.033) y Sa14P (0.4500.123). La producción del pigmento por SH1000 y RN6390 se mantuvo en cantidades similares a las iniciales hasta el día 14. Los espectros de absorción de la STX extraída fueron similares entre las cepas SH1000 y Sa14P y entre Sa14 y RN6390. Por otro lado, la irradiación durante 60 min del pigmento extraído de la cepa SH1000 redujo a un 22% la cantidad del mismo (DO450: 0.4270.028 a 0.0940.018). Se comprobó que la STX actúa como secuestrante específico de oxígeno singlete, ya que inhibió a la mitad (disminución de 605 a 315 unidades de fluorescencia) la generación fotodinámica de esta especie reactiva. Para SH1000, RN6390 y Sa14, la fotoinactivación mediada por AT redujo en 4, 5 y 6 órdenes de magnitud, respectivamente, el número de bacterias comparado con aquellas no irradiadas. Para Sa14P, el mismo tratamiento redujo 6 órdenes de magnitud la cantidad de bacterias viables.Conclusiones: La STX estaría actuando en ausencia de bacterias como secuestrante de radicales libres (oxígeno singlete), sin embargo no se observa una protección significativa de la acción fotoinactivadora entre las cepas con mayor producción de este pigmento. Debido a posibles diferencias en las defensas antioxidantes entre cepas, y el comportamiento de los agentes secuestrantes frente a la acción de las diferentes dosis lumínicas son necesarios estudios complementarios para elucidar el rol de la STX en la fotoinactivación de S. aureus.