15. Producción de una proteína de fusión recombinante entre antígenos de secreción temprana de Mycobacterium tuberculosis Esat-6 y Cfp-10: caracterización inmunológica en células de individuos infectados con el patógeno

ROVETTA, ANA I.; PEÑA, D.; HERNÁNDEZ DEL PINO R.; RECALDE, G.; TATEOSIAN, N.; GUTIERREZ, M.; PALMERO, D.; COLOMBO, M.; GARCIA VE.

Mar del Plata

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2014

Sociedad Argentina de Investigacion Clinica (SAIC)

ESAT-6 y CFP-10 son antígenos de secreción temprana de M. tuberculosis (Mtb), ausentes en la cepa BCG. Ambos son secretados conjuntamente como complejo 1:1 con capacidad de disminuir los niveles de ROS en macrófagos e inhibir la activación T, perjudicando el correcto funcionamiento del sistema inmune. Así, generamos una proteína de fusión (EC) ESAT-6/ CFP-10, emulando el complejo que forman in vivo, para estudiar su inmunogenicidad y efecto sobre la autofagia en células de individuos con infección activa por Mtb (pacientes tuberculososTB) e individuos con infección latente (LTBI). La EC se construyó a partir de plásmidos conteniendo las secuencias de ambos antígenos, amplificando los segmentos y uniéndolos por PCR. Una vez clonada y purificada, se corroboró su secuencia, pureza y capacidad de inducir respuesta inmune. Utilizando células mononucleares de sangre periférica (CMSP) de TB, LTBI y dadores sanos (DS) estimuladas con EC, evaluamos la producción de citoquinas y proliferación celular. Como resultados previos sugieren que ESAT-6 tendría una participación en la respuesta autofágica en macrófagos infectados, investigamos el efecto de EC en la inducción de autofagia en monocitos de los individuos en estudio. La estimulación de CMSP con la proteína EC, o con las proteínas recombinantes individuales ESAT-6 y/o CFP-10, indujo niveles comparables de IFN-γ por linfocitos T y proliferación celular tanto en TB como en LTBI, pero como se esperaba, no produjo respuesta en DS, corroborando su especificidad Asimismo, el estímulo de EC conjuntamente con lisado de Mtb (Mtb-Ag), inhibió los niveles de IFN-γ frente a los producidos por Mtb-Ag solo (p