La proteína de la leucemia promielocítica es un factor de restricción contra el virus dengue

GIOVANNONI FEDERICO; DAMONTE ELSA; GARCÍA CYBELE

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología y II Congreso Latinoamericano de Virología; 2015

Sociedad Argentina de Virología (SAV)

La inmunidad intrínseca está basada en factores celulares de restricciónque son expresados de manera constitutiva, estableciendo así, unmecanismo de defensa inmediato frente a infecciones virales. Laproteína de la leucemia promielocítica (PML, también llamada TRIM19)es un factor de restricción que también puede ser inducido porinterferón (IFN). PML interactúa con más de cien proteínas celulares,formando estructuras nucleares discretas conocidas como NuclearBodies (NBs). En múltiples familias de virus se han identificadoproteínas capaces de interaccionar con PML y, por lo tanto, afectar alos PML-NBs como una estrategia para evadir la respuesta celularantiviral. Dada la ausencia de agentes antivirales y vacunas efectivascontra el virus dengue (DENV), resulta de gran importancia conoceraquellos factores involucrados en la respuesta celular antiviral para sertenidos en cuenta en posibles desarrollos de agentes farmacológicos.En nuestro trabajo, se propuso investigar la actividad de PML frente alserotipo 2 de DENV (DENV-2) en la línea celular humana A549. Elsilenciamiento de PML por medio de siRNAs causó un aumento de 0,76log en la producción de partículas virales a las 24 h post infección (p.i).Análogamente, su sobreexpresión causó una disminución de 1,6 log.Estos resultados fueron corroborados por cuantificación de la expresiónde antígeno viral a través de inmunofluorescencia. Posteriormente, seevaluó el efecto de la infección con DENV-2 sobre el patrón nuclear delos PML-NBs al ser visualizados por inmunofluorescencia. Las imágenesrevelaron una disminución del número de PML-NBs por núcleoobservados a tiempos tardíos p.i. Estos resultados sugieren que lainfección con DENV-2 altera a los PML-NBs. Por otro lado, célulasvecinas a las infectadas mostraron un aumento significativo en elnúmero y tamaño de PML-NBs encontrados por célula. Para estudiar enmayor detalle si este fenómeno estaba relacionado con la liberación deIFN por parte de células infectadas, se cuantificó por RT-PCR en tiemporeal el nivel de expresión de genes involucrados en su vía deseñalización. Estos ensayos revelaron un aumento significativo en laexpresión relativa de IL-6 e IFN-β, entre otros. En particular, laexpresión relativa de PML aumentó hasta 5000 veces ante la infeccióncon DENV-2. Interesantemente, estos efectos se vieron disminuidos encélulas A549 tratadas con un inhibidor de la vía JAK/STAT y en célulasVero (deficientes para la producción de IFN). Esto demuestra que laactividad antiviral intrínseca de PML es independiente de IFN, aunquesu efecto es potenciado por esta molécula.En resumen, nuestro trabajo constituye la primera evidencia de lacontribución de PML a la respuesta antiviral celular contra DENV-2.Serán necesarios otros estudios para determinar el mecanismomolecular detrás de esta actividad.