PROTEÍNAS FOSFATASAS INVOLUCRADAS EN LA FALTA DE ACCIÓN PROLIFERATIVA DE LA ERITROPOYETINA CARBAMILADA EN CÉLULAS CON CAPACIDAD DE DIFERENCIACIÓN ERITROIDE

CHAMORRO ME; MALTANERI ROMINA; GONZÁLEZ G; VITTORI D; NESSE A

Mar del Plata, Pcia. de Buenos Aires

Congreso; LIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2014

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Previamente demostramos la asociación de la falta de acción proliferativa de la eritropoyetina carbamilada (cEpo) en células con capacidad de diferenciación eritroide (UT-7) con un aumento del factor inhibitorio p27kip1, el arresto del ciclo celular y la incapacidad de mantener una fosforilación sostenida de Akt y FOXO3a. Sin embargo la activación de Jak2 por cEpo, al igual que por Epo, al inicio de la señalización sugirió que la acción diferencial entre las eritropoyetinas estaría a nivel de los intermediarios de la señalización de proliferación. Con el fin de investigar esta hipótesis profundizamos el análisis de la activación de vías de proliferación. En presencia de cEpo, tanto la fosforilación de Jak2 como la de ERK fue detectada sólo a los 15 min (Western blotting), disminuyendo significativamente a los 60 min (cEpo60? vs. Epo60?, P<0,05, n=3). Postulamos que el efecto diferencial entre cEpo y Epo estaría asociado al silenciamiento de vías de señalización; evaluamos entonces, la inducción de la fosfatasa PTP1B. Se corroboró el aumento de su expresión en presencia de cEpo, con respecto a la de Epo (citometría de flujo; cEpo vs. Epo, P<0,05, n=3), acompañado por un aumento significativo de la actividad enzimática (cEpo vs. Epo, P<0,05, n=4). La observación de colocalización (microscopía confocal) de PTP1B con el heteroreceptor (REpo/Rßc) sustenta la propuesta de que la fosfatasa defosforila la señalización de cEpo, interrumpiendo la proliferación celular. Además, se incrementó la proliferación de células UT-7 por cEpo en ensayos de inhibición de PTP1B con Cinngel 2Me (33,3±4,4%, P<0,05) y con el inhibidor de fosfatasas o-vanadato (46,4±5,4%, P<0,01, n=3), con respecto a ensayos sin inhibidor. Aunque no se alcanzó el nivel de activación celular por Epo se explica al menos en parte, la desactivación del heteroreceptor. El rol del proteasoma en la terminación de la señal sería clave para dilucidar la acción diferencial entre Epo y cEpo sobre células eritroides.