IQUIBICEN   23947
INSTITUTO DE QUIMICA BIOLOGICA DE LA FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y NATURALES
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
EFECTOS DE LA HIPOXIA DURANTE LA REPROGRAMACIÓN DE CÉLULAS SOMÁTICAS A CÉLULAS MADRE PLURIPOTENTES INDUCIDAS HUMANAS
Autor/es:
MARÍA QUESTA; GABRIEL NEIMAN; CLAUDIA SOLARI; LEONARDO ROMORINI; GUSTAVO SEVLEVER; ALEJANDRA GUBERMAN; SANTIAGO MIRIUKA
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LIX REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2014
Resumen:
Las células somáticas humanas pueden ser reprogramadas a Células Madre Pluripotentes Inducidas (CMPi), las cuales pueden diferenciarse a cualquier célula adulta. Esta característica es de gran interés en medicina regenerativa y en el estudio in vitro de enfermedades genéticas. En trabajos anteriores hemos generado distintas líneas de CMPi por transducción lentiviral bajo condiciones de normoxia e hipoxia, a partir de fibroblastos humanos. Al finalizar el proceso de reprogramación se compararon las eficiencias de generación de CMPi en las dos condiciones de oxígeno a través del conteo de colonias, para así establecer cuál es el método más efectivo. Las líneas fueron luego validadas y caracterizadas, además de evaluarse la expresión de marcadores de pluripotencia y blancos de hipoxia en cultivo hipóxico crónico o agudo sobre líneas establecidas con al menos 5 pasajes. En el presente trabajo nos interesó profundizar en el estudio de las diferencias encontradas en la eficiencia de reprogramación según el nivel de oxígeno, para lo cual se repitieron los experimentos de reprogramación aumentando el tamaño muestral y estudiando el proceso a través de distintas metodologías. Luego, a fin de dilucidar a qué se debían las diferencias se analizó el proceso de reprogramación por In-Cell Western Blot, se investigó el estado proliferativo de las líneas a través de un método de cuantificac ión de ácidos nucleicos y un estudio de viabilidad, y se analizó el estado apoptótico de las células a través de citometría de flujo para Anexina V. Los resultados obtenidos indican que la hipoxia aumenta la cantidad de colonias de CMPi bona fide generadas; sin embargo, encontramos que la expresión de marcadores de pluripotencia es menor que en normoxia, y el resultado final de un mayor número de células reprogramadas se debe a una mayor tasa de proliferación celular durante el cultivo hipóxico post-reprogramación y no al número inicial de células que sufren una reprogramación nuclear.