DERIVACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE CÉLULAS MADRE MESENQUIMALES A PARTIR DE CÉLULAS MADRE PLURIPOTENTES UTILIZANDO UN MEDIO BIOCOMPATIBLE A BASE DE PLAQUETAS LISADAS

LUZZANI CARLOS; NEIMAN GABRIEL; GARATE XIMENA; SOLARI CLAUDIA; GARCIA MARCELA; ERRECALDE ANA LIA; GUBERMAN ALEJANDRA; ROMORINI LEONARDO; SEVLEVER GUSTAVO; MIRIUKA SANTIAGO

Mar del Plata

Congreso; SAIC 2014; 2014

Las células madre mesenquimales (CMM) y las células madre pluripotentes (CMP) presentan un gran futuro en el área de la medicina regenerativa. El suplemento del medio con plaquetas lisadas (PL) demuestra ser muy efectivo para crecer CMM, y el mismo ya ha sido aplicado en investigación clínica. En este trabajo presentamos un nuevo protocolo biocompatible de derivación de CMM a partir de CMP (CMMDP). Utilizando PL como suplemento del medio de cultivo en reemplazo de suero fetal bovino (SFB), logramos obtener a partir de CMP embrionarias y reprogramadas células que presentan morfología mesenquimal, no expresan marcadores de pluripotencia (OCT4, NANOG), y expresan marcadores típicos de CMM (CD90, CD73, CD105 y otros), sin expresar otros marcadores hematopoyéticos. Demostramos la multipotencia de las CMMDP al diferenciarlas a condrocitos, adipocitos y osteoblastos. En ensayos de proliferación de linfocitos estimulados, las CMM-DP de LP demostraron similares capacidades inmunomoduladoras a CMM de cordón umbilical (CMMCU). Estudiamos también la cinética de marcadores de superficie por citometría de flujo y de marcadores de la transición epitelio-mesenquimal mediante qPCR y establecimos que el tiempo de derivación de CMMDP es de aproximadamente 21 días. Comparamos las CMM contra las CMP, fibroblastos y CMMCU midiendo la expresión para proteínas de matriz extracelular, la expresión de marcadores de superficie y el estado de metilación del promotor de OCT4. Observamos que las CMMDP presentan un perfil similar al de CMMCU. Por último, con el objetivo de desarrollar un proceso escalable, medimos la tasa de proliferación de CMMDP derivadas en LP que resulta ser muy superior a utilizar como suplemento SFB. En conclusión, partiendo de una célula adulta (fibroblasto) obtuvimos CMP, y que posteriormente fueron derivadas a CMM en un medio suplementado con PL. Este protocolo demostró ser robusto, económico y biocompatible, presentando entonces, posibles aplicaciones terapéuticas.