Mecanismos de entrada del virus Tacaribe en distintas líneas celulares

ROLDAN, J. S.; FORLENZA, M. B.; CANDURRA, N. A.

Buenos Aires

Jornada; XXXIII Reunión Científica Anual - Sociedad Argentina de Virología; 2013

El virus Tacaribe (TCRV) es un arenavirus no patógeno perteneciente al grupo B en el cual se encuentran virus causantes de fiebres hemorrágicas, como Junín (JUNV). Son virus envueltos con un genoma ARN simple cadena, segmentado y ambisentido. Se conoce que el receptor utilizado para ingresar a la célula por los arenavirus de este grupo es el de transferrina de la especie reservorio correspondiente. Sin embargo, aquellos virus capaces de causar fiebres hemorrágicas también utilizan el receptor de transferrina humano (hTfR1). Para estudiar el mecanismo por el cual TCRV ingresa a la célula, se realizaron ensayos en líneas celulares que expresan diferencialmente el TfR1: células CHO provienen de ovario de hámster, células TRVb, derivadas de las CHO que carecen de receptor de transferrina y las TRVb1 que expresan el hTfR1. Dichas células fueron tratadas con distintas concentraciones de cloruro de amonio y concanamicina A (ConA); drogas que basifican los lisosomas, dansilcadaverina (DC) y clorpromacina (CZ); bloqueantes de la vía endocítica mediada por clatrina, CD) y nistatina (NT); inhibidores de la entrada metil -ciclodextrina (metil -dependiente de colesterol; y con dynasore (DYN) que inhibe la endocitosis dependiente de la proteína dinamina-2. Luego del pre-tratamiento con dichas drogas, las mismas fueron infectadas con TCRV (m.i.= 0,2). Los sobrenadantes se utilizaron para cuantificar la producción viral y el porcentaje de células infectadas se determinó por inmunoflorescencia. Como controles se utilizó toxina colérica e infecciones con JUNV. Previo a dichos tratamientos, se comprobó que las concentraciones utilizadas de los compuestos no fueran citotóxicas mediante la técnica de MTS. Tanto el cloruro de amonio como la ConA produjeron una inhibición de la producción viral y del porcentaje de células infectadas en todas las líneas (50-90%). En las células CHO y TRVb pre-tratadas con NT o MCD no se observó diferencia ni en la producción viral ni en el porcentaje de células CD disminuyó infectadas respecto al control, mientras que en las TRVb1 la ambos parámetros en un 70% aproximadamente. El tratamiento con CZ y DC disminuyó tanto la producción viral como el porcentaje de células infectadas en las CHO y TRVb pero en las TRVb1 solo la DC produzco una disminución del 70% aproximadamente. Por otro lado, las tres líneas celulares pre-tratadas con DYN presentaron un 80% de disminución en ambos parámetros. Los resultados obtenidos nos permiten postular que TCRV utilizaría distintas vías de entrada. En células que no expresan el hTfR1, el virus ingresaría preferentemente por la vía endocítica mediada por clatrina mientras que en células que expresan dicho receptor, la principal vía utilizada aún no se pudo determinar, si bien en las tres líneas ensayadas, la entrada sería dependiente de la proteína dinamina-2 y del pH. Estos resultados están siendo comprobados con construcciones dominantes negativas para las distintas vías endocíticas.