CONICET | Buscador de Institutos y Recursos Humanos

La búsqueda de compuestos capaces de marcar la membrana plasmática y/o el sistema de endomembranas celulares se ha convertido en un foco de atención en los últimos años por su amplia variedad de aplicaciones, tales como estudios de migración, adhesión y fusión celular, ensayos de translocación, dinámicas de proteínas y en el caso particular de los virus para estudiar los procesos de entrada, desnudamiento, ensamblaje y brotación. Recientemente, hemos sintetizado novedosos derivados de fluoresceína con largas cadenas carbonadas liposolubles empleando una de las reacciones multicomponentes más versátiles, la reacción Ugi de cuatro componentes (U-4CR), que se basa en la reactividad excepcional del grupo funcional isocianuro. En el presente trabajo el objetivo fue analizar el efecto de la infección con HSV-1 sobre la distribución intracelular de los nuevos derivados sintéticos liposolubles de la fluoresceína. Para ello se estudió la citotoxicidad de los compuestos sobre células A549 a través del ensayo de cristal violeta, concomitantemente con su evaluación sobre la replicación del virus HSV-1 mediante la cuantificación del rendimiento viral luego de distintos esquemas de tratamiento. Finalmente, por microscopía de fluorescencia se analizó la capacidad de los compuestos de marcar membranas celulares y su distribución en células infectadas con HSV-1. Los resultados obtenidos mostraron que los derivados de la fluoresceína (denominados U-FLUO 2, 1B y 5B) no afectaron la viabilidad celular luego de 24hs de tratamiento con concentraciones de hasta 100µM. En relación a la multiplicación viral, el compuesto U-FLUO 2 disminuye el título viral con los tres esquemas de tratamiento ensayados, mientras que U-FLUO 1B y 5B aumentan la replicación viral o no la afectan dependiendo del tipo de tratamiento. Las imágenes de las células A549 tratadas con los derivados de fluoresceína a diferentes tiempos mostraron que éstos se encuentran distribuidos a través de la membrana plasmática y como estructuras granulares en el citoplasma, y su localización no varía con el tiempo. En las células infectadas con HSV-1, el patrón de fluorescencia de los compuestos U-FLUO 2 y 5B cambia considerablemente, se observan gránulos de mayor tamaño e intensidad más concentrados alrededor del núcleo, al tiempo que la membrana plasmática también se marca mucho más. En conclusión, los nuevos derivados fluorescentes podrían ser de utilidad para seguir por microscopía en células vivas aquellos pasos de la multiplicación viral que involucran el sistema de endomembranas celulares.