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Las infecciones por adenovirus (AdV) ocurren principalmente en niños de temprana edad. Este año, en nuestro país, de las infecciones respiratorias agudas virales estudiadas en menores de 2 años, el 15 % correspondió a casos provocados por AdV, siendo además la principal causa de gastroenteritis viral en infantes. En individuos adultos inmunocompetentes AdV puede manifestarse como enfermedades respiratorias, (kerato) conjuntivitis, gastroenteritis y cistitis hemorrágica. Hasta el momento no existe una terapia preventiva ni curativa específica contra AdV, en algunas infecciones se emplean el cidofovir o la ribavirina. Por otra parte, el ciclo de replicación de AdV demora 24 horas en completarse, por lo cual, todas las técnicas para cuantificar actividad antiviral que detectan formación de placas o la reducción de la acción citopática (ACP) pueden llegar a tardar varios días en producir resultados visibles. Actualmente, se dispone de ensayos de PCR cuantitativa (qPCR) más sencillos y rápidos para determinar el título viral. Por esta razón, el objetivo del presente trabajo fue desarrollar un método rápido para evaluar la actividad anti-AdV de compuestos de síntesis basado en la técnica de qPCR. Primero se tuvieron en cuenta las variables dependientes del virus, como tiempo de infección y multiplicidad de infección (m.i.) para la preparación del templado. Luego, se probaron dos métodos diferentes reportados para la extracción del DNA viral (un kit comercial y otro método basado en la ruptura de la célula por cambios en la presión osmótica). La amplificación se realizó empleando primers para dos genes virales diferentes (las proteínas PIII y E1A). Los resultados obtenidos muestran que: no es necesario extraer el ADN viral de las células infectadas para realizar la reacción de PCR, los extractos obtenidos luego de resuspender las células en agua deionizada se pueden utilizar directamente como templado, siendo mejor la eficiencia con el primer para PIII que con el de E1A (pendiente=-3,168 y -2,815, respectivamente). Respecto de la m.i. se observó que a m.i. mayores a 1, aparecen otros productos de reacción no específicos, y no se mantiene la linealidad con las diluciones y los valores de Ct obtenidos. Cuando la m.i. es muy baja (menores a 0,001) aún luego de 48 hs de infección, no se obtienen niveles de amplificación detectables. La normalización se realizó cuantificando DNA total en las distintas muestras empleando un Nano-Drop. Luego se probó la actividad antiviral de cinco azaesteroides sintéticos tanto mediante el ensayo de qPCR como con los métodos de inhibición del rendimiento viral, de la reducción de la ACP, y de la acción sobre la expresión de proteínas virales, a concentraciones no citotóxicas. Los resultados obtenidos indican que tres de ellos poseen una actividad anti-AdV detectada tanto por PCR como por las otras técnicas. En conclusión, se dispone de un ensayo más rápido para la detección de actividad anti-AdV y varios de los compuestos esteroidales presentan propiedades antivirales inéditas frente a este virus.