Efectos de la hipoxia en la generación de células madre pluripotentes inducidas humanas

QUESTA, MARÍA; SOLARI, CLAUDIA MARÍA; LOSINO, NOELIA; ROMORINI, LEONARDO; BLUGUERMANN, CAROLINA; FERNÁNDEZ, DARIO; VIDELA RICHARDSON, GUILLERMO; SEVLEVER, GUSTAVO; GUBERMAN, ALEJANDRA; MIRIUKA, SANTIAGO

Mar del Plata

Congreso; LVI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica, LX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2012

Las células somáticas humanas pueden ser reprogramadas a Células Madre Pluripotentes Inducidas (CMPi), las cuales pueden, a su vez, diferenciarse a cualquier célula adulta. Esta característica es de gran interés en medicina regenerativa y en el estudio in vitro de enfermedades genéticas. Para su validez se requieren ciertos criterios como morfología de células pluripotentes, autorenovación ilimitada, expresión de marcadores de pluripotencia, downregulación de marcadores de diferenciación, independencia de los factores utilizados para su reprogramación y conformidad con pruebas de diferenciación. Los objetivos del presente trabajo fueron la reprogramación de fibroblastos humanos a CMPi bajo condiciones de normoxia e hipoxia a fin de comparar eficiencias, caracterizar las líneas obtenidas y analizar su identidad pluripotente en las distintas condiciones. La reprogramación se realizó introduciendo Factores de Transcripción embrionarios mediante un sistema lentiviral. Se establecieron las líneas de CMPi y se las validó, confirmándose características morfológicas y proliferativas de células pluripotentes, alta expresión de marcadores de pluripotencia, capacidad de diferenciación a las tres capas germinales y formación de teratomas, confirmando pluripotencia in vitro e in vivo. Se comparó la eficiencia de su generación en hipoxia y normoxia y se evaluó la expresión de marcadores de pluripotencia y blancos de hipoxia en cultivo crónico o agudo al 5% de O2. Se encontró que la generación de CMPi en hipoxia es menos eficiente que en normoxia, pero no se encontraron diferencias de pluripotencia entre las líneas generadas en normoxia y en hipoxia crónica. En cambio, se encontraron diferencias en la expresión de marcadores de pluripotencia durante el cultivo hipóxico agudo, en contraste con normoxia. En conclusión, la expresión de marcadores de pluripotencia no se ve aumentada al cultivar CMPi en hipoxia crónica, pero podría estarlo en hipoxia aguda.