Actividad antiviral in vitro de beta-carbolinas naturales y sus derivados N-metilados frente a virus con genoma ARN.

PANOZZO ZENERE J,D.; PICCINI, L.E.; DAMONTE, E.B.; PONCE, M.A.; CASTILLA, V.

Valle Hermoso

Jornada; XXXII Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Virología; 2012

Sociedad Argentina de Virología

Las beta-carbolinas son un grupo de alcaloides derivados del norharmano, compuesto aromático de tres anillos fusionados tipo 6-5-6, que presentan diversas propiedades biológicas incluida la actividad antimicrobiana. El objetivo de este trabajo fue evaluar la actividad antiviral de las beta-carbolinas harmina, harmano, norharmano y harmol así como de sus derivados N-metilados frente a virus envueltos con genoma ARN como el virus Junín (JUNV) y el virus dengue (DENV), ambos patógenos para el hombre, y el virus de la estomatitis vesicular (VSV), de importancia veterinaria. La citotoxicidad de los compuestos se evaluó por el método del MTS luego de incubar células Vero con diferentes concentraciones de cada uno de los compuestos durante 48 h. Para cada compuesto se determinó la CC50 (concentración que reduce en un 50% la viabilidad celular). La harmina resultó ser el compuesto con mayor actividad citotóxica indicando que la presencia del sustituyente metoxi (CH3O) en C-7 disminuye la viabilidad celular. La metilación del anillo pirrólico produjo una marcada disminución de la citotoxicidad de los derivados metilados con respecto a los compuestos de partida. Luego se evaluó el efecto de los compuestos sobre la multiplicación viral. Para ello, las células Vero se infectaron (moi = 1 para DENV y JUNV y moi= 0,01 para VSV) y luego del periodo de adsorción los cultivos se cubrieron con medio de cultivo conteniendo diferentes concentraciones no citotóxicas de los compuestos. A las 48 h post-infección se cuantificó el rendimiento viral utilizando el método de formación de placas. Para cada compuesto se determinó la CE50 (concentración que reduce en un 50% el rendimiento viral) y el índice de selectividad (IS) como el cociente CC50/CE50. Los únicos compuestos activos frente a VSV fueron el harmano (IS=16) y su derivado metilado (IS= 30,6) sugiriendo la importancia de la presencia de un sustituyente metilo en C-1 y de la ausencia de  sustitución en C-7. Los compuestos harmol y N-metilharmina resultaron activos frente a DENV presentando un IS de 51,3 y 61,2, respectivamente. En el caso de JUNV el compuesto más activo fue el N-metilnorharmano que exhibió un IS mayor a 15. La capacidad inhibitoria de los compuestos más activos se corroboró analizando la expresión de antígenos virales mediante ensayos de inmunofluorescencia indirecta. Los compuestos no presentaron actividad inactivante a excepción de la N-metilharmina que exhibió una escasa actividad virucida frente a DENV, con una concentración inactivante 50 (CI50) cinco veces mayor que la CE50 frente a este virus. En conclusión en este trabajo se demostró que a concentraciones no citotóxicas ciertas beta-carbolinas naturales y sus derivados sintéticos inhiben la multiplicación de virus ARN de diferentes familias siendo DENV el virus ensayado más susceptible a la acción de este tipo de compuestos. Asimismo se constató que la metilación del anillo N- pirrólico aumentó la selectividad de los compuestos activos.