Factores celulares involucrados en la entrada del serotipo 3 del virus dengue a la c¨¦lula hu¨¦sped.

PICCINI, L.E.; CASTILLA, V.; DAMONTE, E.B.

Curitiba

Jornada; XX Jornadas de J¨®venes Investigadores; 2012

El virus del dengue (DENV) es un arbovirus perteneciente a la familia Flaviviridae, el cual es transmitido al hombre por los mosquitos Aedes aegypti y Aedes albopictus. Puede causar diferentes afecciones, como ser la fiebre del dengue, una enfermedad febril aguda, benigna y auto-limitada, o formas m¨¢s severas y potencialmente letales: el dengue hemorr¨¢gico y el s¨ªndrome de shock por dengue. En la actualidad no se dispone de vacunas, ni de terapias antivirales frente al virus del dengue, siendo de vital importancia contrarrestar esta situaci¨®n debido a su condici¨®n end¨¦mica. Es necesario tener en cuenta para su desarrollo que, tanto las vacunas como los antivirales, deben proteger ante los cuatro serotipos del virus (DENV-1, DENV-2, DENV-3 y DENV-4), ya que los mismos co-circulan en determinadas regiones y est¨¢n estrechamente relacionados entre s¨ª. Por otro lado, tambi¨¦n resulta indispensable el conocimiento del ciclo de multiplicaci¨®n viral para el hallazgo de potenciales blancos de agentes antivirales. En este campo, una estrategia interesante es el bloqueo de los pasos iniciales del ciclo viral, los cuales determinan la entrada a la c¨¦lula hu¨¦sped. Actualmente, los trabajos publicados sobre el mecanismo de entrada de DENV realizados con los serotipos 1, 2 y 4 muestran informaci¨®n contradictoria y escasa, sugiriendo que el virus posee mecanismos de entrada dependientes del serotipo y del tipo celular hu¨¦sped. El objetivo general de este proyecto es el estudio de la entrada del serotipo 3 del virus del dengue para facilitar la b¨²squeda de nuevas mol¨¦culas que tengan un potencial terap¨¦utico dirigido al tratamiento y la prevenci¨®n de la infecci¨®n. Para ello, se estudi¨® el mecanismo de entrada viral a c¨¦lulas de mam¨ªfero Vero y A549 mediante ensayos bioqu¨ªmicos y virol¨®gicos. Se utilizaron inhibidores farmacol¨®gicos de las diferentes v¨ªas endoc¨ªticas celulares  y se evalu¨® su efecto sobre la entrada del virus a trav¨¦s de diferentes acercamientos: (a) sobre la multiplicaci¨®n viral por ensayos de rendimiento viral, (b) evaluando la internalizaci¨®n viral mediante la t¨¦cnica de centros infecciosos y (c) la expresi¨®n de la glicoprote¨ªna E de envoltura viral por inmunofluorescencia indirecta. Se observ¨® una fuerte disminuci¨®n de la multiplicaci¨®n de DENV-3 cuando las c¨¦lulas fueron pretratadas con cloruro de amonio y concanamicina A, dos inhibidores de endocitosis que elevan el pH endosomal; sin embargo, no hubo inhibici¨®n por pretratamiento con clorpromazina o mono-dansilcadaverina, ambos inhibidores de la endocitosis mediada por clatrina. Tambi¨¦n se observ¨® que el compuesto dynasore, que bloquea la v¨ªa dependiente de dinamina, inhibi¨® la entrada del virus. En conclusi¨®n, la entrada infecciosa de DENV-3 a c¨¦lulas Vero y A549 ocurrir¨ªa predominantemente por una v¨ªa endoc¨ªtica independiente de clatrina, dependiente de pH ¨¢cido y dinamina. Sin embargo, es necesario continuar los estudios para determinar si DENV-3 utilizar¨ªa adem¨¢s otras v¨ªas alternativas de forma minoritaria, debido a que se observ¨® una inhibici¨®n leve cuando las c¨¦lulas fueron pre-tratadas con nistatina y metil-¦Âciclodextrina, dos agentes que afectan la composici¨®n de colesterol de la membrana celular, por lo que bloquean la endocitosis dependiente de ¡°lipid rafts¡±/colesterol.