ENTRADA DEL VIRUS JUNÍN EN CÉLULAS 3T3 Y 3T3 DC-SIGN: ENSAYOS FARMACOLÓGICOS Y DE MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA.

FORLENZA, MB; ROLDÁN, JS; MARTINEZ MG, CORDO, SM; CANDURRA, NA.

Cordoba

Jornada; XXXI Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Virología; 2012

Sociedad Argentina de Virologia

El virus Junín (JUNV), agente etiológico de la Fiebre Hemorrágica Argentina, utiliza el receptor de transferrina humano para infectar a la célula huésped. En ensayos anteriores pudimos determinar que, al igual que para otros virus envueltos como HIV, citomegalovirus, Dengue y Ébola, las glicoproteínas de la envoltura viral expresadas por JUNV son reconocidas por la lectina DC- SIGN (dendritic cell- specific ICAM-3 grabbing non- integrin), una lectina tipo C (proteína de membrana tipo 2 dependientes de calcio). En las células dendríticas dermales y de las mucosas intersticiales las lectinas tipo C interactúan con patrones moleculares conservados en un gran grupo de microorganismos, e internalizan estos patógenos para su procesamiento y presentación antigénica. Diversos estudios demuestran que la vía involucrada para la entrada de patógenos a través de esta lectina es la dependiente de clatrina. Además, varios trabajos muestran que DC-SGN se organiza en microdominios enriquecidos en colesterol en la membrana plasmática de células dendríticas, de los cuales depende la unión e internalización de HIV. Estudios anteriores utilizando Clorpromacina y construcciones dominantes negativas para Eps15 y la GTPasa dinamina mostraron que la entrada de JUNV en las células 3T3 y en células 3T3 que expresan establemente DC-SIGN (3T3-DC-SIGN) sería la endocitosis mediada por la vía de clatrina. El objetivo de este trabajo fue continuar con ensayos que permitan determinar la vía endocítica utilizada por JUNV tanto en células 3T3 poco permisivas a su infección como en las mas permisivas 3T3-DC-SIGN. Para esto, se utilizaron los inhibidores farmacológicos Dynasore, como inhibidor general de la endocitosis, Dansilcadaverina, para la vía dependiente de clatrina y finalmente Nistatina y Metil B- ciclodextrina para la vía dependiente de colesterol. El porcentaje de inhibición con respecto al control se calculó por rendimiento viral y por inmunofluorescencia indirecta (IFI). Al mismo tiempo, se estudió la entrada viral utilizando la técnica de microscopia electrónicas de transmisión (MET). Los resultados mostraron una inhibición de rendimiento viral en cultivos de 3T3 y 3T3 DC-SIGN de entre 60 y 80% luego del tratamiento con Dynasore, entre 70 y 98% con Dansylcadaverina, y entre un 70 y 90% con Metil B- ciclodextrina, mientras que no se obtuvo inhibición con Nistatina. Resultados similares se encontraron analizando la expresión de la nucleoproteína viral por IFI. Por otro lado en las primeras imágenes por MET se observaron viriones asociados a membranas electrodensas, que corresponderían a futuras vesículas recubiertas por clatrina. Los resultados obtenidos hasta el momento confirman que el mecanismo de entrada de JUNV en las células 3T3 y 3T3-DC-SIGN es la endocitosis en vesículas recubiertas por clatrina, con cierta dependencia de colesterol.