Detección de ácidos orgánicos producidos por células trofoblásticas

GARCÍA, MARIELA; PÉREZ LEIRÓS, CLAUDIA; VIDELA, MARIELA; VOTA, DAIANA; MERECH, FÁTIMA; MONGE, MARÍA EUGENIA

San Luis

Congreso; IV CONGRESO ARGENTINO DE ESPECTROMETRÍA DE MASA; 2022

Sociedad Argentina de Espectrometría de Masa (SAEM)

La placenta funciona como un órgano de metabolismo que asegura el aporte de nutrientes, oxígeno y factores de crecimiento para el desarrollo fetal. Las células trofoblásticas articulan estas funciones: coordinan señales inmunológicas y metabólicas del entorno placentario atendiendo a demandas energéticas muy variables a lo largo de la gestación. En el marco del presente estudio se espera identificar las vías metabólicas y los metabolitos producidos por células trofoblásticas (línea celular humana de primer trimestre) frente a estímulos como factores de crecimiento, entre otros, asociados al desarrollo de la placenta mediante abordajes de metabolómica no dirigidos. La detección de ácido cítrico, ácido láctico, ácido pirúvico, ácido succínico y ácido itacónico en este sistema in vitro mediante un abordaje semi-dirigido permitirá, en una primera aproximación, aportar a la comprensión de mecanismos de comunicación célula-célula con relevancia fisiológica en la interacción materno-fetal. Para ello, se desarrolló un método analítico por UPLC-ESI-QTOF-MS que permite la determinación simultánea de los 5 ácidos orgánicos. Para separar y detectar los metabolitos, se desarrolló un método de cromatografía en fase reversa utilizando una columna C18 HSS T3. Las fases móviles consistieron en (A) una solución acuosa 0,1 % (v/v) de ácido fórmico en 95% acetonitrilo / 5 % agua y (B) una solución acuosa 0,1 % (v/v) de ácido fórmico, utilizando un gradiente de 16 minutos. La temperatura de la columna fue de 30 ºC y las muestras se mantuvieron a 5 ºC durante el análisis. Los parámetros del espectrómetro de masas fueron optimizados para maximizar la relación señal/ruido y los datos se adquirieron en modo de ionización negativo. La metodología propuesta para la preparación de muestras involucra la extracción de metabolitos intracelulares de modelos in vitro utilizando nitrógeno líquido y metanol y el empleo de estándares internos para ser utilizados tanto en el abordaje de metabolómica semi-dirigido como en uno no dirigido. Se evaluó la respuesta de cada analito en función de la concentración, se determinó el rango lineal, el límite de detección y el límite de cuantificación, para optimizar las condiciones de preparación de muestra. Actualmente, se están evaluando diferentes condiciones que permitan tanto la detección de los ácidos orgánicos de interés como así también el mayor número de metabolitos posible para analizar las muestras mediante ambos abordajes de metabolómica.