ANÁLISIS DEL PERFIL DE PROTEÍNAS Y SUS MODIFICACIONES POST-TRADUCCIONALES DE PLANTAS JÓVENES DE Arabidospis thaliana SOMETIDAS A ESTRÉS HÍDRICO

SCARPECI TELMA ELEONORA; VALLE ESTELA MARTA

Rosario

Congreso; XVII Congreso y la XXXV Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2015

En este trabajo se presentan resultados de unanálisis de proteómica bottom up utilizando plantas de Arabidopsis thaliana Col-0 de 21 y 36 días crecidas en condiciones normales y plantasde 36 días sujetas a un tratamiento de deficiencia hídrica controlada. Los extractos proteicos fueron analizados con un equipo nanoLC-MS/MSVelos Orbitrap (Thermo Fisher). Las proteínas se identificaron utilizando los programas Mascot y Scaffold y se seleccionaron aquellas proteínas que tenían una probabilidad mayor a 99% de que las mismas hayan sido identificadas correctamente. Con este criterio, el número total de proteínas identificadas fue 1002 que fueron luego clasificadas en categorías funcionales utilizando el programa MapMan. El conjunto de proteínas detectadas en cada una de las muestras fueron analizadas utilizando un diagrama de Venn para determinar las relaciones entre los distintos conjuntos de datos. En este análisis se observó que 634 proteínas eran comunes a las tres muestras, 17 y 21 proteínas se detectaron sólo en Col-0 de 36 días control y sequía respectivamente y 22 proteínas fueron únicas para Col-0 de 21 días. Se analizaron además las modificaciones post-traduccionales en distintas proteínas y se observó que la enzima ribulosa bisfosfatocarboxylasa/oxygenasa activasa (RCA) presentó un claro patrón diferencial en estas modificaciones al comparar las tres muestras. Los niveles de oxidación de las metioninas presentes en RCA fueron mayores en plantas de 21 que en las de 36 días (condiciones control y sequía). Esto coincide con lo informado por otros grupos de investigación, donde se observó que el grado de oxidación de las proteínas primero aumenta con la edad de la planta seguido por una abrupta caída en estos niveles que comienza cuando la planta tiene 20 días. De las 20 metioninas que existen en la secuencia de RCA, 6 están oxidadas sólo en Col-0 de 21 días, 1 en Col-0 de 21 días y Col-0de 36 días sometidas a sequía y 2 metioninas están oxidadas en las tres muestras. La oxidación de metionina cambia la naturaleza química del residuo,lo cual podría tener un gran impacto en la función de la proteína. Este hecho,junto a la naturaleza reversible de la oxidación, hace de esta modificación de la metionina de una importancia regulatoria significativa. Por otro lado, en RCA se observaron diferencias entre las muestras analizadas en el patrón de fosforilación: en Col-0 de 21 días se encontró una treonina fosforilada y en Col-0 de 36 días control se encontró una tirosina fosforilada. La fosforilación reversible de proteínas es un importante mecanismo de regulación. Este trabajo pone en evidencia los cambios que ocurren con la edad de la planta y bajo diferentes condiciones de crecimiento en el perfil de proteínas y en el patrón de modificaciones post-traduccionales, las cuales podrían tener un papel importante en la actividad de la proteína.