1ª Genoteca de cDNA normalizada de Rhodnius prolixus

LAVORE, A., PAGOLA, L

Asunción, Paraguay

Jornada; XV Jornadas de Jóvenes Investigadores; 2007

Universidad Nacional del Paraguay

<!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman"; mso-ansi-language:ES-TRAD; mso-fareast-language:ES-TRAD;} @page Section1 {size:595.3pt 841.9pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:35.4pt; mso-footer-margin:35.4pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> Rhodnius prolixus es un hemíptero hematófago perteneciente a la familia Reduviidae y es el principal vector de la enfermedad de Chagas en el norte de Sudamérica y en América Central. Como parte del proyecto de generar información genómica de R. prolixus, dentro del Consorcio Internacional de Secuenciación del Genoma de R. prolixus, hemos generado la primera genoteca normalizada de este hemíptero. Una de las formas de analizar los genes que se expresan en un organismo es mediante el secuenciamiento al azar de genotecas funcionales de ADNc, obteniendo secuencias correspondientes a genes que se expresan en un momento dado del ciclo de vida y bajo distintas condiciones fisiológicas. Estos métodos convencionales son útiles para la producción de genotecas cuantitativas pero no para genotecas cualitativas donde aquellos genes que se expresan en menor abundancia son ocultados por aquellos que se expresan en mayor medida. La ventaja de contar con una genoteca normalizada es que ésta nos permite nivelar la representación de cada ADNc mediante la eliminación selectiva de los transcriptos más abundantes e incrementando así la probabilidad de encontrar transcriptos menos abundantes. Esta genoteca normalizada está enriquecida en fragmentos de ADNc largos a partir de ninfas I a V y huevos embrionados de Rhodnius prolixus. La misma se llevó a cabo utilizando un método de normalización basado en una nucleasa termoestable (nucleasa específica de ADN de doble cadena del cangrejo de Kamchatka) (Zhulidov et al., 2004), y LD-PCR. La genoteca fue clonada en el vector pDNR-lib, y posteriormente secuenciada en el Washington University Genome Sequencing Center. A partir de la misma se han identificado alrededor de 1600 clones, constituyendo un importante aporte al estudio de la genómica de este insecto vector.