Genomica y embriología de triatominos

LAVORE A.; PAGOLA L.; SALDAÑA G.; HUMBERT LAN G.; RIVERA POMAR R

Facultad de Ciencias Naturales y Museo (FCNYM), UNLP, La Plata, Argentina

Jornada; 1as Jornadas de Jóvenes Investigadores2005; 2005

Facultad de Ciencias Naturales y Museo (FCNYM)

GENÓMICA Y EMBRIOLOGÍA DE TRIATOMINOS  LAVORE A.; PAGOLA L.; SALDAÑA G.; HUMBERT LAN G.; RIVERA POMAR R. Centro Regional de Estudios Genómicos, Universidad Nacional de La Plata (rrivera@gwdg.de)  Los insectos de la subfamilia Triatominae son vectores de la enfermedad de Chagas. Si bien la biología y fisiología de los mismos ha sido ampliamente estudiada, aun no contamos con informacion detallada de su genoma ni de las interacciones génicas durante el desarrollo embrionario. El objetivo de este trabajo es la generación e interpretación de información genómica por medio de la secuenciación de Expressed Sequence Tags (ESTs) de diferentes estadíos de Triatoma infestans y Rhodnus prolixus. Se sintetizaron genotecas de ADNc de embriones de T. infestans y R. prolixus así como de insectos adultos y ninfas V de T. infestans. De estas últimas se secuenciaron al azar clones y se inició la construcción de una base de datos de RNAm expresados. Asimismo se estudió la morfología y el tiempo de desarrollo de T. infestans y R. prolixus en los estadíos embrionarios tempranos. Se determinó, por inspección morfológica y por inmunohistoquímica usando un anticuerpo monoclonal generado contra la proteina ENGRAILED de Drosophila melanogaster, que los procesos de segmentación ocupan entre los 3 y 6 dias post-puesta para ambas especies. Asimismo se generó una genoteca embrionaria de ADNc de huevos entre 3 y 10 dias post-puesta. De dicha genoteca se realizó el clonado dirigido de genes involucrados en el desarrollo embrionario de insectos (eve, wg, h, cad, zen, hb, tll) por medio de la técnica de PCR usando oligonucleótidos degenerados. La expresión y función de dichos genes se estudiarán en el futuro por medio de las técnicas de hibridación in situ de ARN y de ARN interferente sistémico.  Palabras clave: Rhodnius prolixus, Triatoma infestans, genómica, embriogénesis.  GENOMICS AND EMBRIOLOGY OF TRIATOMINAE  The species of the subfamily Ttriatominae are vector of Chagas Disease. Despite the large body of knowledge on the biology and physiology of the group, the understanding of their genome and gene interactions during ebryological development are still incomplete. The aim of this work is to provide and interpret genomic information on Triatoma infestans and Rhodnus prolixus. We synthesized a variety of cDNA libraries and porceded to random sequence clones to generate a preliminary EST database. Moreover we studied the morphology of T. infestans and R. prolixus early embryos (2-6 Days After Egg Laying, DAEL) and determine the steps of the segmentation process by immunohistochemistry using monoclonal anti-ENGRAILED antibodies. We determined that in both species segmentation process is completed at the 6th DAEL. By degenerated PCR on embryonic cDNA libraries (3-10 DAEL) we cloned several genes involved in the segmentation process (eve, wg, h, cad, zen, hb, tll). The expression and function of these genes will be studied by RNA in situ hybridization and parental RNA interference.  Keywords: Rhodnius prolixus, Triatoma infestans, genomics, embryogenesis.