Estudios estructurales del dominio SEA del homólogo murino del antígeno CA125

NOGUERA MARTÍN EZEQUIEL; PRIMO MARÍA EVANGELINA; L.N.F. SOSA; ERMÁCORA MARIO ROBERTO

La Plata

Congreso; XXXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2008

El antígeno humano CA125, codificado por el gen MUC16, es una proteína de membrana ampliamente utilizada como marcador de cáncer de ovario[1]. Posee una región extracelular altamente O-glicosilada, con numerosas repeticiones de dominios SEA. El homólogo murino de MUC16 tiene un único dominio SEA, cuya estructura se determinó mediante técnicas de RMN[2]. Los dominios SEA comprenden aproximadamente 120 residuos y se encuentran siempre en la región extracelular de proteínas, en general, altamente glicosiladas, pero su función exacta se desconoce. Muchos miembros de esta familia sufren tempranamente un corte proteolítico luego de su biosíntesis, y las subunidades generadas permanecen asociadas como un heterodímero en la superficie celular, por lo que se ha propuesto que los dominios SEA cumplen un rol en procesos de señalización acoplados a la disociación del heterodímero[3]. Para investigar la base estructural de este fenómeno de proteólisis, se expresó el dominio SEA del homólogo murino de MUC16 (MUC16SEA) recombinante en E. coli y se purificó por IMAC e intercambio iónico. Mediante este protocolo, la proteína se obtuvo con sus únicos dos residuos de cisteína reducidos, aunque sólo accesibles al reactivo DTNB en condiciones desnaturalizantes. Los experimentos de desnaturalización térmica, monitoreados por dicroísmo circular a 220 nm, demostraron que MUC16SEA es altamente estable, determinándose una TM de aproximadamente 75°C. Para explorar la flexibilidad conformacional de MUC16SEA, se hicieron experimentos de proteólisis controlada con tripsina, que revelaron un único sitio de corte. En experimentos donde se incubó MUC16SEA altamente purificada, se observó la acumulación de un producto de proteólisis de 14,5 KDa, muy resistente a la degradación posterior. Así, MUC16SEA es altamente termoestable y es proteolizada in vitro, dos características fuertemente asociadas en otros dominios SEA que se han caracterizado en detalle[4]. Referencias: [1] Bast, R. C, Jr. et al, Clin. Invest. 1981, 68, 1331?1337. [2] Maeda, T. et al, J. Biol. Chem 2004, 279, 13174?13182. [3] Wreschner, D. H. et al, Protein Sci. 2002, 11, 698-706. [4] Johansson, D. G. A. et al, J. Mol. Biol. 2008>, 377, 1117-1129. Agradecimientos: Este trabajo recibió el apoyo de subsidios de CONICET, UNQ y ANPCyT.