INVESTIGADORES
ALVAREZ Vanina Eder
congresos y reuniones científicas
Título:
Expresión de cruzipaína madura activa en el sistema baculovirus-células de insecto.
Autor/es:
ALVAREZ, V.; PARUSSINI, F.; CAZZULO, J.J.
Lugar:
Viña del Mar. Chile.
Reunión:
Congreso; Reunión Iberoamericana de Bioquímica, Biología Molecular y Biología Celular. SAIB 2000.; 2000
Institución organizadora:
Sociedad de Bioquímica y Biología Molecular de Chile. Sociedad de Biología Celular de Chile. Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular. Sociedad Española de Bioquímica y Biología Molecular.
Resumen:
La cruzipaína (Cr) es la principal cisteína proteinasa (CP) de
Trypanosoma cruzi. La Cr madura consta de un dominio catalítico, con
alta homología con CPs de la familia de la papaína, y un dominio
C-terminal (CT) que caracteriza a las CPs de Tipo I de
Trypanosomátidos. Si bien se conoce la estructura 3-D de una forma
truncada del dominio catalítico (cruzaína), no hay hasta ahora datos
estructurales sobre el CT y la relación entre ambos dominios. Ello se
debe en buena medida a que hasta ahora no había sido posible expresar
Cr activa conteniendo el CT, pues el mismo es procesado por los
sistemas bacterianos, probablemente por la falta de modificaciones
post-traduccionales. Hemos expresado Cr en el sistema eucariótico de
células de insecto (Sf21) - baculovirus, que permite en general, altos
niveles de expresión heteróloga con plegamiento y localización
correctos. Lisados de células infectadas con el baculovirus
recombinante, estudiados por SDS-PAGE seguido de Western blot,
mostraron una única banda reconocida por el suero anti-Cr natural, con
un Mr similar. Geles de SDS-PAGE con gelatina incorporada indicaron una
única banda de actividad, también con movilidad similar a la de la Cr
natural. La Cr recombinante fue purificada por cromatografía de
quelatos metálicos, y está siendo caracterizada en comparación con la
enzima natural. Toda la evidencia obtenida sugiere que la Cr
recombinante contiene el CT, y puede esperarse, por lo tanto, que sea
utilizable para intentar su cristalización y determinación de
estructura 3-D.