Nano-Alendronato sódico

HIGA L; BADA R; MORILLA MJ; ROMERO EL

Cordoba Capital

Conferencia; NanoCordoba 2014; 2014

Universidad Nacional de COrdoba

Vesículas con incorporación de alendronato sódico Leticia Higa, Romina Bada, Maria Jose Morilla y Eder Romero. Programa de Nanomedicinas, Universidad Nacional de Quilmes Introducción: El alendronato sódico (ALN), bisfosfonato nitrogenado, presenta propiedades anti-inflamatorias e inhibe la proliferación induciendo cambios en el ciclo celular y/o apoptosis en varios tipos de macrófagos y células tumorales [1]. La enfermedad inflamatoria artritis reumatoidea está mediada por la acumulación de macrófagos activados en la membrana sinovial que reviste las articulaciones [2]. Éstos son responsables de la liberación de citoquinas pro-inflamatorias. A raíz de esta señalización los neutrófilos son reclutados al área de inflamación donde liberan proteasas que desencadenan el daño tisular. Por lo tanto, el tratamiento de enfermedades inflamatorias haciendo blanco en macrófagos con el objeto de corregir el desbalance de citoquinas pro-inflamatorias, es una estrategia terapéutica sobre la cual hay un creciente interés [3]. Su administración oral o endovenosa produce efectos colaterales con una llegada mínima al sitio de acción. Debido a esto, su incorporación en vesículas ultradeformables compuestas por lípidos polares totales de Halorubrum tebenquichense (LPT) incrementaría su captura por los macrófagos al ser administradas por vía tópica [4]. Metodología: Con el objetivo de preparar vesículas ultradeformables cargadas con ALN, se llevaron a cabo diferentes combinaciones de fosfatidilcolina de soja (SPC), colato de sodio (ColNa), tween 80 (T80) y LPT mediante hidratación de la película lipídica. Después de la extrusión, las vesículas se purificaron por columna de exclusión molecular (CEM) en Sephadex G-50. Posteriormente, la concentración de ambos, fosfolípidos (FL) y n-BF se determinaron por el método de Bötcher, tras la extracción de los FLs en fase orgánica y el ALN en fase acuosa utilizando el método de Bligh & Dyer. El tamaño de las vesículas se determinó por DLS, y el potencial Z por PALS, utilizando un NanoZsizer Malvern. Además, la suspensión de vesículas se forzó a pasar a través de dos membranas apiladas de poro de un diámetro de 50 nm, ante una presión externa de 0,8 MPa aplicada desde un tubo de N2 conectado al Thermobarrel extruder. La ultradeformabilidad (D) fue calculada a partir de determinar el flujo de lípidos según Cevc [5]. Por otro lado, la viabilidad de células J774 (macrófagos murinos), HaCaT (queratinocitos humanos) y SK MEL 28 (melanoma humano) tras el tratamiento con las vesículas cargadas con ALN, se determinó como actividad de la enzima mitocondrial succinato deshidrogenasa empleando una sal de tetrazolio (MTT). Asimismo, las vesículas y el LPS se incubaron con las células J774 con lipopoliscarido (LPS) y se determinó la liberación de IL-12, citoquina pro-inflamatoria, empleando el método de ELISA. Resultados: Las vesículas compuestas por: SPC y T80 (1:1 m/m) (LUD-ALN) y LPT:SPC:T80 (0,5:1,5:1 m/m) (AUD-ALN) cargadas con 10 mg/ml ALN resultaron ultradeformables. Los LUD-ALN presentaron un tamaño nanométrico de 113,2 ± 8,0 nm, potencial Z de -0,63 ± 0,26 mV, valor D: 4930,78 ± 904 y relación ALN/FL 23,4 % m/m. Los AUD-ALN presentaron un tamaño promedio de 109,8 ± 6,8 nm, potencial Z -7,3 ± 0,04 mV, valor D: 5103 ± 1003 y relación ALN/FL 36,5 % m/m. Con respecto a los ensayos in vitro, la viabilidad sobre J774 disminuyó 20% al incubar con a) AUD-ALN: 0,08 mg/ml FL- 29 µg/ml ALN, b) LUD-ALN: 0,08 mg/ml FL- 19 µg/ml ALN y c) 2500 µg/ml ALN. Ambas vesículas conteniendo ALN no redujeron la viabilidad sobre SK-MEL 28 ni HaCaT al cabo de 24h de incubación. Las vesículas se incubaron 14 y 48 h sobre J774 y en los sobrenadantes se determinó IL-12. AUD-ALN fue capaz de decrecer 40 veces los valores de IL-12 en macrófagos activados por LPS en comparación a LPS libre tanto a 14 como a 48 h. Conclusión: AUD-ALN podría ser un candidato a emplearse como agente antiinflamatorio administrado tópicamente. Referencias: [1] David B. Burr and R. Graham G. Russell. 2011; 1-146 [2] Raimund W Kinne, Rolf Bräuer, Bruno Stuhlmüller, Ernesta Palombo-Kinne and Gerd-R Burmester. 2002 [3] Nathan C. 2002. Nature 420, 846?852. [4] Higa LH, et al. 2012. Nanomedicine. 1319- 1328 [5] Van den Bergh et al. 2001. Int. J. Pharm. 217, 13?24