Nanopartículas lipídicas sólidas y nanoestructuradas empleando lípidos de arquebacterias hiperhalófilas

HIGA L; JEREZ H; ROMERO EL; MORILLA MJ

Cordoba Capital

Congreso; NanoCordoba 2014; 2014

Universidad Nacional de COrdoba

Nanopartículas lipídicas sólidas y nanoestructuradas Leticia Higa, Horacio Jerez, Eder Romero y Maria Jose Morilla Programa de Nanomedicinas, Universidad Nacional de Quilmes Introducción: El objetivo es diseñar, preparar y caracterizar nanopartículas lipídicas sólidas (NLS) y nanoestructuradas (NLN) para administrarse oralmente empleando materiales novedosos, lípidos polares totales (LPT) y lípidos neutros (LN) extraídos de arqueas halófilas Halorubrum tebenquichense. Previamente en el Programa de Nanomedicinas (PNM) se determinó la composición de los lípidos polares totales (LPT) de Halorubrum tebenquichense, correspondiendo a una mezcla de PGP-Me, PG, BPG además de los sulfoglicolípidos SDGD-5 (1 -O-[-D-manosa-(2´-SO3H)-(1´→2´)--D-glucosa]-2,3-di-O-fitanil-sn-glicerol) y SDGD-5PA (1 -O-[-D-manosa-(2´-SO3H)-(1´→2´)--D-glucosa]-2,3-di-O-fitanil-sn-glicerol-ácido fosfatídico. Los liposomas preparados a partir de estos LPT mostraron una mayor captura mediante los receptores de manosa de los macrófagos [1]. Metodología: En primer lugar, se prepararon NLS y NLN empleando las técnicas de emulsión-ultrasonicación empleando homogeneizador seguido de ultrasonicación. [2-4]. Los lípidos fueron: ácido esteárico y Compritol ATO 888 (sólidos) y Mygliol 840. Se caracterizaron determinando los tamaños y potencial Z empleando un NanoZsizer al tiempo cero, transcurrido 1 semana y un mes. Por otro lado, se identificaron los LN por cromatografía en capa delgada (CCD) empleando 3 mezclas de solvente de desarrollo a) acetona: éter de petróleo (20:80 % v/v), b) acetato de etilo: benceno (30:70% v/v) y c) metanol:cloroformo (7:93 % v/v) revelandóse con iodo y UV. Continuando con las formulaciones de las nanopartículas, se reemplazo en diferentes porcentajes LPT por SPC y LN por Mygliol 840 (lípido líquido). Luego, se caracterizaron como se describió anteriormente. Además, se llevaron a cabo ensayo de citotoxicidad de las NLS y NLN sobre J774 determinando la actividad de la enzima mitocondrial succinato deshidrogenasa empleando una sal de tetrazolio (MTT) al cabo de 24h. Asimismo, se determinó la cinética de captura de las NLS y NLN con incorporación de Coumarin 6 de los macrófagos, J774 y un total de 2 x 105 células se analizaron por citometría de flujo (BD FACSCalibur?; BD Biosciences, San Jose, CA, USA). Resultados: Las NLS compuestas de compritol, SPC y T80, 4:1,2:3%, mantuvieron el tamaño de 350 nm y 250nm y potenciales Z de -10mV almacenados a 4ºC durante 31d. Las NLN compuestas de compritol, Mygliol 840, SPC y T80, en una relación en masa de 2:2:3:1,2% resultaron estables. Los tamaños fueron de 250nm y potenciales Z de -10 mV tanto almacenados a 4ºC al cabo de 31d. Por otro lado, los LN identificados por CCD fueron beta caroteno, gamma caroteno, licopeno, cantaxantina, bacterioruberinas según datos bibliográficos [5]. Tanto en las NLS como en las NLN se reemplazaron un 25, 50, 75 y 100% SPC por LPT y Mygliol 840 por LN. Los LPT actuarían como surfactantes y LN como una mezcla de lípidos líquidos (pto fusión: ~170ºC). Estas nanopartículas presentaron tamaño en el rango nanométrico entre 200-300nm. Los módulos de potenciales Z fueron aumentando a medida que incrementaron los LPT. Las NLS y NLN con LPT y/o LN no disminuyeron la viabilidad celular a 0,004% m/m del core lipídico. Las nanopartículas incrementaron su captura con la sustitución de LPT en lugar de SPC, como surfactante. Conclusión: las NLS y NLN podrían ser exitosos candidatos para incororar una droga lipofílica en una administración oral con alta capacidad de ser capturados por macrófagos. [1] Gonzalez et al, 2009 [2] Das et al, 2012 [3] Castelli et al, 2005 [4] Silva et al, 2011 [5] Dalal Asker et al, 2001