Nanovacunación tópica: perfil inmunológico generado por arqueosomas ultradeformables conteniendo homogenato de Leishmania braziliensis

LETICIA H HIGA; ANA PAULA PEREZ; MARIA J MORILLA; EDER L. ROMERO

Potrero de los Funes, San Luis

Congreso; Simposio de Nanomedicinas-Tercer Escuela de Nanomedicinas; 2012

Asociación Argentina de Nanomedicinas

Introducción: en América del Sur la infección por la especie Leishmania braziliensis es la principal causa de leishmaniasis cutánea (LC) y muco-cutánea (LMC) en humanos. La LC es crónica y causa latencia, lo que puede conducir a la diseminación del parasito a la mucosa oral o nasal años después de su resolución clínica. La quimioterapia de primera línea empleada actualmente contra LC tiene severas limitaciones porque: (i) suele no ser fácilmente accesible para quienes la necesitan (ii) consiste en inyecciones diarias durante semanas (iii) pueden estar asociados a efectos colaterales y (iv) la resistencia a los antimoniales pentavalentes se esta convirtiendo en un problema creciente. Por lo tanto, existe una urgente necesidad de terapias eficaces y profilaxis contra Lb. El presente trabajo es una prueba de concepto para investigar si antígenos totales de promastigotes de Leishmania braziliensis incorporados en AUD podrían generar inmunidad sistémica ag-dependiente luego de aplicados tópicamente a ratones BALB/c. Materiales y métodos: el extrato de promastigotes enteros de L. braziliensis solubilizados en detergente se incorporó en arqueosomas ultradeformables (SoyPC:lipidos polares de Halorubrum tebenquichense: colato de sodio, 3:3:1 p:p) (AUD-AgLb)1,2 y en liposomas ultradeformables (soyPC:colato de sodio 6:1 p:p) (LUD-AgLb) por el método de hidratación de la película lipídica, sonicación y extrusión. Las vesículas se caracterizaron por tamaño, potencial Z y relación proteínas/lípidos y se determinó su citotoxicidad sobre macrófagos murinos (J774) y queratinocitos humanos (HaCaT) y su capacidad de inducción de citoquinas en macrófagos. Luego, se administraron tópicamente 2 veces/semana por 6 semanas y en la 7° semana 5 días consecutivos en forma no oclusiva sobre un área de 2 cm2 sobre el lomo de ratones BALB/c2. Los títulos de IgG y los isotipos IgG1 e IgG2a séricos se determinaron por ELISA. Resultados: Los AUD-AgLb de 74 ± 50 nm, -27,6 mV potencial Z, relación proteína/lípido 0,60-0,5 % p/p y LUD-AgLb de 82 ± 26 nm, -13,9 mV potencial Z y relación proteína/lípido 0,50% p/p, no resultaron citotóxicos sobre células J774 y HaCaT en el rango de 0,2-1,6mg/ml fosfolípidos y 1-8 µg/ml AgLb. Tras la administración tópica de AUD-AgLb, los títulos de IgG séricos producidos por fueron 1 log menor a los inducidos por el extracto administrado intramuscularmente con el adyuvante universal con alúmina, pero 1 log mayor que los generados por LUD-AgLb administrado tópicamente. Mientras que la administración tópica del extracto en buffer no produjeron títulos de anticuerpos detectables. Los títulos de IgG generados por AUD-AgLb se mantuvieron hasta el día 49, mientras que los generados por LUD- AgLb solo fueron detectables el día 14 y 21. Adicionalmente, AUD-AgLb generaron respuestas inmunes sistémicas donde predomino el isotipo IgG2a. AUD fue un fuerte inductor de TNF tanto sobre macrófagos no activados como sobre los activados con LPS, capaz de decrecer los valores de IL-6 en macrófagos activados y sin efecto sobre IL-10. En cambio la inducción de TNF por LUD fue menos pronunciada, llamativamente acompañada por la inducción de IL-10. Conclusión: Estos resultados sugieren que los AUD podrían usarse como agentes de vacunación tópica, con potencial acción terapéutica, sobre infecciones tipo Leishmaniasis cutánea. Respuesta inmune humoral luego de una inmunización tópica de ratones BALB/c con vesículas ultradeformables, buffer AgLb y alúmina-AgLb. Los valores representan la media ± SD, *** p