NANOVACUNA ANTILEISHMÁNICA: ARQUEOSOMAS ULTRADEFORMABLES

LETICIA H HIGA; DIANA I. RONCAGLIA,; MARIA J MORILLA; EDER L. ROMERO

Ixtapa Zihuatanejo

Congreso; Congreso Nacional de Ciencias Farmacéuticas; 2008

NANOVACUNA ANTILEISHMÁNICA: ARQUEOSOMAS ULTRADEFORMABLES Higa L. H, Cédola M. T, González R., Roncaglia, D., Morilla M. J y Romero E. L Programa de Nanomedicinas(PNM). Departamento de Ciencia y Tecnología. Universidad Nacional de Quilmes. Buenos Aires. Argentina. Área temática: Nanomedicinas nanotec farmaceutica/otros   Introducción: Objetivo: Diseñar nanonaves (NV), arqueosomas (ARQ), capaces de generar adyuvancia, con énfasis en la respuesta inmune tanto local como sistémica, que pudieran usarse como vacuna antileishmánica por vía tópica, capaces de penetrar en forma intacta el estrato córneo. En estudios previos llevados a cabo en el PNM, se ha hallado una potente respuesta adyuvante para ARQ preparados a partir de lípidos polares totales (LPT) extraídos de cuatro arquebacterias (AB) halófilas del género Halorubrum, que se denominaron sobrenadante (SN), cristales grises (CG), cristales rojizos (CR) y barro negro (BN). Las mismas fueron aisladas de estratos de una muestra de suelo de Salinas Chicas (Península de Valdez), y luego de administrarse los ARQ por vía sub-cutánea,  evocaron respuestas tanto celular como humoral y de memoria significativamente mayores a las obtenidas con el adyuvante universal alúmina.   Metodología: Con el objeto de determinar la mayor ultradeformabilidad (UD) de los ARQ, se llevó a cabo un diseño experimental combinando los LPT extraídos CG, BN, SN y CR de las AB, colato de sodio (ColNa), activador de borde y/o fosfatidilcolina de soja (SPC), por hidratación de la película lipídica.  Para la caracterización se cuantificaron los fosfatos, se determinaron los diámetros promedios efectivos y los índices de polidispersión  por Dynamic Light Scattering (DLS) y se ensayaron las UD mediante un sistema para forzar el pasaje de una suspensión a través de poros de tamaño menor al de las vesículas, aplicando  presión de 0.8 MPa. La elasticidad de las bicapas de los ARC (D) se calculó de acuerdo a Van den Bergh et al. (2001), donde D=J(rv/rp)2. El flujo (J) de los ARC a través de una barrera nanoporosa se calculó como el área bajo la curva de la gráfica de los fosfolípidos (PL) vs. tiempo (t), rvel tamaño de la vesícula después del pasaje y rp es el diámetro del poro de la membrana. Posteriormente, para su conservación, las muestras fueron deshidratadas por liofilización, evaporación máxima al vacío en Speed Vac System AES 1010, y desecación al vacío hasta lograr una masa de secado constante. A continuación, se reconstituyeron y se caracterizaron. Por otro lado, se estudiaron las interacciones moleculares por espectroscopía infrarroja.  Próximamente, se incorporará extracto de Leishmania en BN:SPC:ColNa y se administrará por vía tópica en ratones, posteriormente, se determinará el título de IgG de los mismos por Elisa.   Resultados y discusión: La formulación ternaria de BN: SPC: ColNa (3:3:1 p/p) con un tamaño de 140 nm presentó una elasticidad igual a 3515 similar a lo obtenido para los  liposomas UD (UDL) (Montanari J et al, 2007). BN:SPC:ColNa deshidratadas por evaporación máxima al vacío conservaron su tamaño al hidratarse. A partir del espectro infrarrojo se deduce que esta presente la banda a 2030 cm-1  atribuible a la interacción del ColNa con el agua.