Arqueosomas ultradeformables penetran transdérmicamente generando respuesta inmune

LETICIA H HIGA; PRISCILA SCHILRREFF; ANA PAULA PEREZ; MAIARA A. IRIARTE; DIANA I. RONCAGLIA,; MARIA J MORILLA; EDER L. ROMERO

Ciudad Autonoma de Buenos Aires

Conferencia; Simposio de Nanomedicina; 2011

Asociacion Argentina de Nanomedicinas

Introducción: Los arqueosomas ultradeformables (A-UD) son liposomas unilamelares compuestos de fosfatidilcolina de soja, colato de sodio y lípidos polares totales (LPT, mezcla de arqueoles o éteres poliisoprenoides glicerol) extraídos de las arqueas Halorubrum tebenquichense en una relación 3:3:1 (p/p). Estas vesículas permiten combinar propiedades adyuvantes (propia de los LPT) por un lado, con propiedades mecánicas (ultradeformabilidad  de la matriz lipídica por reducción de su modulo elástico)  por otro. En este trabajo, se llevaron a cabo ensayos ex vivo para estudiar el perfil de penetración de A-UD  en explantos de piel humana utilizando el modelo de penetración de Saarbrücken y tape stripping. Además, se determinó el efecto citotóxico por los métodos LDH y MTT y se ensayó la internalización celular por captura de los A-UD con Rodamina PE sobre las líneas celulares J-774 (macrófagos) y HaCat (queratinocitos humanos). Adicionalmente, se administraron los A-UD conteniendo la proteína modelo ovoalbúmina (OVO) semanalmente por cuatro semanas y un boost al mes, en forma tópica no oclusiva en un área de 2 cm2 sobre el lomo afeitado de ratones Balb/c. Por otro lado, A-UD con Alendronato (ALE) se administraron durante 5 días consecutivos. Dos días después de la última administración, se siguió el esquema anterior de aplicación de A-UD OVO. Adicionalmente, se estudió la penetración de A-UD, L-UD con HPTS (sonda fluorescente piranina) y HPTS libre sobre piel de ratones Balb-c y se incubaron por 1 hora, posteriormente, se observó el seccionamiento óptico al microscopio confocal   Resultados: Los A-UD se prepararon por hidratación de la película lipídica y posterior extrusión. Los A-UD, diámetro 140nm y potencial Z -50mV, exhiben las siguientes características: reconstitución exitosa posthidratación por speed-vac en ausencia de crioprotectores, retienen su tamaño y  ultradeformabilidad inicial; no modifica la viabilidad hasta una concentración de 1mM en ambas líneas celulares; no se registro internalización en células HaCaT, en cambio fue internalizado por células J774 con una cinética lineal al aumentar el tiempo de incubación hasta 5 h y penetración profunda a través de la piel humana intacta. En el ensayo in vivo, A-UD OVO entre 0.075 y 0.6 mg de OVO y lípidos entre 0.3 y 0.6 mg generaron respuestas primarias y de boost similares. Por otro lado, el mismo régimen de 0.075 mg OVA/0.6 mg lípidos en liposomas ultradeformables (L-UD) convencionales (sin LPT)  generaron títulos de IgG entre uno y dos logarítmos menores que los obtenidos tras la administración de 0.075 mg OVA/0.3 mg lípidos en A-UD. Además, la administración tópica de A-UD generó IgG1 e IgG2a. La respuesta inmune generada por A-UD-OVO fue retrasada por el pre-tratamiento con ALN y UDA-ALN. En el estudio de penetración en ratones, el HPTS penetró indistintamente en L-UD HPTS o A-UD HPTS, mientras que HPTS libre no penetro el estrato córneo.   Conclusión: Los A-UD demostraron poseer capacidad de penetración así como propiedades adyuvantes  pudiendo ser empleados como nano agentes de vacunación tópica o distribuidores de material terapéutico a estratos más profundos de la piel.