Cuantificación de la proliferación celular en glándula mamaria de bovinos tratados con un modificador de la respuesta biológica durante la involución.

RUFFINO V, HEFFEL S, LORENTE JA, CALVINHO L, DALLARD B.

Santa FE, Argentina

Otro; VIII Encuentro de Jóvenes Investigadores de la UNL.; 2004

Secretaría de Ciencia y Técnica. Universidad Nacional del Litoral. Federación Universitaria del Litoral.

Introducción: La involución normal de la glándula mamaria bovina en la etapa de vaca seca es de fundamental importancia para asegurar una máxima producción de leche durante la lactancia siguiente. La glándula mamaria bovina es altamente susceptible a las nuevas infecciones intramamarias (IIM) durante las etapas tempranas del período de vaca seca. Consecuentemente, los compuestos que aceleren la involución mamaria podrían disminuir la incidencia de IIM en este período. Los modificadores de la respuesta biológica (MRB) o compuestos inmunomoduladores se han utilizado individualmente para potenciar regímenes de terapia antibiótica o de inmunización específica (vacunas), y pueden convertirse en una alternativa eficaz a los métodos tradicionales de control de las enfermedades. La inoculación intramamaria de lipopolisáridos (LPS) bacterianos ha sido extensamente utilizada en vacas en lactancia para estudiar los eventos que tienen lugar durante la inflamación de la glándula mamaria. Teniendo en cuenta los datos bibliográficos actuales, no existen antecedentes a cerca del efecto de la infusión intramamaria de  LPS bacterianos en glándulas infectadas con Staphylococcus aureus sobre la proliferación celular durante la involución post lactacional. El PCNA (proliferation cell nuclear antigen) es una proteína no-histona de 36kd asociada a la polimerasa delta altamente conservada entre las especies. Es un marcador de la fase G1 del ciclo celular (síntesis baja de PCNA) que aumenta con al comienzo de la fase S (síntesis alta de PCNA) para retornar a valores basales durante el período final de la fase S. Dentro de este contexto, el objetivo del presente trabajo fue cuantificar la proliferación celular con PCNA en glándulas mamarias libres de infección o infectadas con S. aureus tratadas con un agente inmunomodulador intramamario en el momento de la interrupción de la lactancia. La involución normal de la glándula mamaria bovina en la etapa de vaca seca es de fundamental importancia para asegurar una máxima producción de leche durante la lactancia siguiente. La glándula mamaria bovina es altamente susceptible a las nuevas infecciones intramamarias (IIM) durante las etapas tempranas del período de vaca seca. Consecuentemente, los compuestos que aceleren la involución mamaria podrían disminuir la incidencia de IIM en este período. Los modificadores de la respuesta biológica (MRB) o compuestos inmunomoduladores se han utilizado individualmente para potenciar regímenes de terapia antibiótica o de inmunización específica (vacunas), y pueden convertirse en una alternativa eficaz a los métodos tradicionales de control de las enfermedades. La inoculación intramamaria de lipopolisáridos (LPS) bacterianos ha sido extensamente utilizada en vacas en lactancia para estudiar los eventos que tienen lugar durante la inflamación de la glándula mamaria. Teniendo en cuenta los datos bibliográficos actuales, no existen antecedentes a cerca del efecto de la infusión intramamaria de  LPS bacterianos en glándulas infectadas con Staphylococcus aureus sobre la proliferación celular durante la involución post lactacional. El PCNA (proliferation cell nuclear antigen) es una proteína no-histona de 36kd asociada a la polimerasa delta altamente conservada entre las especies. Es un marcador de la fase G1 del ciclo celular (síntesis baja de PCNA) que aumenta con al comienzo de la fase S (síntesis alta de PCNA) para retornar a valores basales durante el período final de la fase S. Dentro de este contexto, el objetivo del presente trabajo fue cuantificar la proliferación celular con PCNA en glándulas mamarias libres de infección o infectadas con S. aureus tratadas con un agente inmunomodulador intramamario en el momento de la interrupción de la lactancia. La involución normal de la glándula mamaria bovina en la etapa de vaca seca es de fundamental importancia para asegurar una máxima producción de leche durante la lactancia siguiente. La glándula mamaria bovina es altamente susceptible a las nuevas infecciones intramamarias (IIM) durante las etapas tempranas del período de vaca seca. Consecuentemente, los compuestos que aceleren la involución mamaria podrían disminuir la incidencia de IIM en este período. Los modificadores de la respuesta biológica (MRB) o compuestos inmunomoduladores se han utilizado individualmente para potenciar regímenes de terapia antibiótica o de inmunización específica (vacunas), y pueden convertirse en una alternativa eficaz a los métodos tradicionales de control de las enfermedades. La inoculación intramamaria de lipopolisáridos (LPS) bacterianos ha sido extensamente utilizada en vacas en lactancia para estudiar los eventos que tienen lugar durante la inflamación de la glándula mamaria. Teniendo en cuenta los datos bibliográficos actuales, no existen antecedentes a cerca del efecto de la infusión intramamaria de  LPS bacterianos en glándulas infectadas con Staphylococcus aureus sobre la proliferación celular durante la involución post lactacional. El PCNA (proliferation cell nuclear antigen) es una proteína no-histona de 36kd asociada a la polimerasa delta altamente conservada entre las especies. Es un marcador de la fase G1 del ciclo celular (síntesis baja de PCNA) que aumenta con al comienzo de la fase S (síntesis alta de PCNA) para retornar a valores basales durante el período final de la fase S. Dentro de este contexto, el objetivo del presente trabajo fue cuantificar la proliferación celular con PCNA en glándulas mamarias libres de infección o infectadas con S. aureus tratadas con un agente inmunomodulador intramamario en el momento de la interrupción de la lactancia. Materiales y Métodos: Se utilizaron seis vacas Holstein no preñadas al final de la lactancia. Después del último ordeño se administró vía intramamaria un MRB a base de LPS en un cuarto mamario, mientras que en otro cuarto se infundió un placebo como control. La infección de los cuartos mamarios con S. aureus se consideró como covariable.  La obtención de las muestras de tejido glandular se realizó en un matadero local a los 14 y 21 días de la interrupción de la lactancia. El MRB utilizado contiene lipopolisacárido proveniente de una cepa no patógena de Escherichia coli, 45 mg/100 ml de fracciones membranosas y ribosomales de la misma cepa, expresadas al 50% de ácido ribonucleico, liposomas y agentes de formulación.  La concentración de LPS, expresada en  microgramos de KDO, fue de 0,35 en un volumen total de 10 ml de vehículo. Se tomaron 2 muestras de cada cuarto mamario y se fijaron en formol bufferado al 10% según protocolos histológicos de rutina. La proliferación celular se evaluó a través de la expresión de PCNA y se realizó inmunhistoquímica (IHQ) (método streptavidina-peroxidasa). Las imágenes fueron analizadas con el programa Image Pro-Plus 4.1.0.1®. Se cuantificaron las células epiteliales alveolares que mostraron una intensa tinción nuclear (3+) y el resultado se expresó como porcentaje de células intensamente marcadas. El análisis estadístico se realizó por ANOVA y  test de Duncan. Resultados y Conclusiones A los 14 y 21 días de interrumpida la lactancia, el análisis del índice de proliferación celular, expresado como % de células PCNA intensamente positivas, reveló que no se observaron diferencias significativas entre los cuartos de animales tratados con LPS (infectados y no infectados con  S. aureus) y entre los animales tratados con placebo (infectados y no infectados con S. aureus). Concluimos que la infusión de un MRB intramamario al momento del secado en glándulas infectadas o no con S. aureus, no modifica la proliferación celular que ocurre durante el proceso de involución normal en el tejido mamario. A los 14 y 21 días de interrumpida la lactancia, el análisis del índice de proliferación celular, expresado como % de células PCNA intensamente positivas, reveló que no se observaron diferencias significativas entre los cuartos de animales tratados con LPS (infectados y no infectados con  S. aureus) y entre los animales tratados con placebo (infectados y no infectados con S. aureus). Concluimos que la infusión de un MRB intramamario al momento del secado en glándulas infectadas o no con S. aureus, no modifica la proliferación celular que ocurre durante el proceso de involución normal en el tejido mamario. A los 14 y 21 días de interrumpida la lactancia, el análisis del índice de proliferación celular, expresado como % de células PCNA intensamente positivas, reveló que no se observaron diferencias significativas entre los cuartos de animales tratados con LPS (infectados y no infectados con  S. aureus) y entre los animales tratados con placebo (infectados y no infectados con S. aureus). Concluimos que la infusión de un MRB intramamario al momento del secado en glándulas infectadas o no con S. aureus, no modifica la proliferación celular que ocurre durante el proceso de involución normal en el tejido mamario.