Identificación y cuantificación de células somáticas en leche bovina por método directo.

BARAVALLE, C.; RUFFINO, V.; HEFFEL, S.; DALLARD, B.; CALVINHO, L.F.; ORTEGA, H.

Córdoba, Argentina

Congreso; XI Congreso Argentino de Ciencias Morfológicas. I Congreso Internacional de Educación e Investigaciones en Ciencias Morfológicas. I Encuentro de Histotecnólogos.; 2008

Las células presentes en la leche bovina son definidas globalmente como células somáticas (CS), siendo principalmente leucocitos polimorfonucleares (PLMN), monocitos-macrófagos, linfocitos T y B y células epiteliales descamadas. El objetivo del presente trabajo fue identificar y cuantificar células somáticas (epiteliales, mononucleares y polimorfonucleares) en extendidos de leche por inmunohistoquímica (IHQ) como alternativa a la citometría de flujo (CF). Para la realización de los extendidos se recolectaron muestras de leche provenientes de establecimientos de la zona. En  forma simultánea, de las mismas muestras se tomó una alícuota para realizar la determinación por CF del total de CS. Se seleccionaron muestras con recuentos crecientes de CS totales. Para la identificación de las células epiteliales en los extendidos de leche se llevó a cabo la técnica de IHQ indirecta, utilizando un anticuerpo primario anti-Human Cytokeratin (Dako, Clone: AE1- AE3) con reactividad para las citoqueratinas 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 13, 14, 15, 16 y 19. El revelado se realizó con diaminobencidina y se contracoloreó con Hematoxilina. Los PLMN y las células mononucleares se identificaron según la morfología del núcleo y la relación núcleo/citoplasma. La cuantificación de las CS se realizó mediante análisis digital de imágenes utilizando el programa Image Pro Plus 3.0.1. Tabla 1: Valores absolutos de células somáticas/ml RCS/ml Células epiteliales/ml Células mononucleares/ml PLMN/ml 145.000 25.215 83.360 36.424 381.000 35.814 129.540 215.646 700.000 38.360 207.900 453.740 1.600.000 32.160 278.080 1.289.760 Se calcularon los porcentajes de los diferentes tipos de células evaluados y se extrapolaron al total de células halladas por CF para hallar los valores absolutos de cada tipo celular/ml y se observó que al aumentar el número de CS cuantificadas por CF también aumentaron los valores de los PLMN  y mononucleares mientras que los valores de las células epiteliales permanecieron relativamente constantes (tabla1). Estos resultados se condicen con los hallados en la bibliografía cuando se analizan las variaciones de los distintos tipos celulares utilizando CF, lo que demuestra que la técnica directa aquí evaluada para identificar CS en leche puede ser una herramienta valiosa como alternativa a la CF.