Interacción entre el virus de la inmunodeficiencia humana y las células hepáticas estrelladas

LOPEZ, ALICIA; QUARLERI JORGE; DELPINO M. VICTORIA

Congreso; XL Reunión Científica Anual de la SAV 2022; 2022

La fibrosis hepática está caracterizada por la acumulación de matriz extracelular, principalmente por las células hepáticas estrelladas (LX-2). El objetivo de este trabajo fue determinar si la interacción entre el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) y las células LX-2 puede inducir un fenotipo fibrótico.Las LX-2 se infectaron con VIH (pNL43-VSV-GFP) a una MOI de 0,5 pg (p24). El VIH fue capaz de infectar y multiplicarse en las LX-2 (citometría de flujo y producción de p24 en sobrenadantes), preservándose la presencia de genoma proviral en las LX-2 (Alu-PCR). Para evaluar si la progenie viral producida por las LX-2 era infectiva, se expusieron linfocitos T (Jurkat) a sobrenadantes de cultivo de LX-2 infectadas. Además, para determinar la capacidad de replicación del virus, y si la progenie producida era wild type (WT) se utilizó AZT (inhibidor de la transcriptasa inversa) y AMD3100 (antagonista de CXCR4), respectivamente. Los resultados indicaron que los sobrenadantes de cultivo de las LX-2 infectadas contenían VIH (WT) capaz de infectar y replicar en una célula permisiva.Las LX-2 pasan del estado quiescente a un estado activado (fibrótico), caracterizado por un aumento en la proliferación, migración, deposición de colágeno y la producción de mediadores proinflamatorios y profibrogénicos como α-SMA, TGF-β e IL-6 junto con la pérdida de la capacidad de almacenar lípidos. Nuestros resultados indicaron que la infección por VIH induce la secreción de IL-6 (ELISA) pero no la producción de colágeno (Sirius Red). Por otro lado, tampoco aumentó la transcripción de TGF-β, α-SMA (RT-PCR), ni la proliferación celular (violet proliferation dye, citometría de flujo). Las LX-2 fueron cultivadas en presencia de ácido oleico (100μM) con el objetivo de inducir el aumento en el tamaño de las gotas lipídicas presentes en el estado celular quiescente. La infección por VIH de estas células indujo una reducción en la cantidad de gotas lipídicas respecto a los controles sin infectar (Bodipy 493/503, citometría). Esto indica que el VIH es capaz de inducir la pérdida de las gotas lipídicas lo que correlaciona con la pérdida del estado de quiescencia. Para determinar si las LX-2 eran susceptibles a la infección por VIH (WT) evaluamos la expresión de CCR5, CXCR4 y CD4 por citometría de flujo. Nuestros resultados indicaron que CCR5 y CD4 se expresan a niveles altos, mientras que CXCR4 a niveles bajos. Además, pocas células co-expresan CCR5 y CD4 en su superficie. Cuando evaluamos la susceptibilidad de las LX-2 a la infección con VIH-AD8 (R5) no observamos niveles detectables de infección (citometría de flujo). Nuestros resultados indican que las células LX-2 son permisivas a la infección por VIH preservando el genoma proviral. La infección por VIH contribuye al desarrollo del fenotipo fibrótico induciendo la pérdida de gotas lipídicas e incrementando la producción de IL-6 sin modificar la transcripción de TGF-β y α-SMA, así como tampoco la deposición de colágeno.