Macrófagos expuestos al VIH y SARS-CoV-2. Modulación recíproca de la replicación y efecto sobre astrocitos

GUANO TOAQUIZA ALEX; QUARLERI JORGE; DELPINO M. VICTORIA

Congreso; XL Reunión Científica Anual de la SAV 2022; 2022

La neuroinvasión del VIH ocurre poco después de la infección a través del paso de células inmunitarias infectadas por el virus hacia el SNC. Los astrocitos son las células más abundantes del sistema nervioso central (SNC) y mantienen un ambiente adecuado para las neuronas que puede ser alterado durante un proceso infeccioso. El objetivo del presente trabajo fue determinar la incumbencia del “cross-talk” entre los macrófagos infectados con VIH y/o SARS-CoV-2 sobre la modulación de las funciones de los astrocitos.Los macrófagos se obtuvieron por diferenciación de monocitos de sangre periférica (MDM) utilizando el factor estimulante de colonias macrófagos (M-CSF, 30ng/ml). Además, se utilizó la línea U373 (astrocitos humanos de glioma). Se usó la cepa AD8 del VIH, R5-trópica y la cepa Wuhan de SARS-CoV-2. Los MDM se infectaron con: (a) VIH (0,01 pg p24/cél), (b) SARS-CoV-2 (MOI de 0,1 PFU), y (c) ambos (VIH-24 h-SARS-CoV-2). La replicación viral se determinó a los 3 y 6 días post-infección (dpi) referidos a la exposición con SARS-CoV-2 (VIH: p24 intracito por citometría; SARS-CoV-2: RNA N y ORF1ab, RT-qPCR). Usando un inóculo de 0,01 pg p24/cél, la replicación del VIH en MDM resultó mayor ante la coexistencia del SARS-CoV-2 respecto de aquellos VIH-monoinfectados (3dpi: 0,69% vs. 0,26%; 6dpi: 3,39% vs 1,59%). En contraste, cuando se infectó los MDM con VIH usando un inóculo de 1 pg p24/cél, la replicación viral disminuyó ante la coexistencia del SARS-CoV-2 respecto de la monoinfección (3dpi: 26,7% vs 55,7%; 6dpi: 59,9% vs 65,8%). Por su parte, la replicación del SARS-CoV-2 no se alteró tras el desafío simultáneo con el VIH.Dada la baja expresión del receptor CD4-correceptores CXCR4/CCR5, la susceptibilidad de los astrocitos al VIH libre es pobre. La modulación de la expresión de éstos fue evaluada (citometría) tras la exposición a los 3 medios condicionados (sobrenadantes de MDM infectados –VIH: 0,01 pg p24/cél; SARS-CoV-2: 0,1PFU-), observándose que los astrocitos aumentaron la expresión de CD4, no así de los correceptores, tras exponerse a los medios condicionados obtenidos de MDM en las 3 condiciones de infección. El estado anormal de estos astrocitos fue evaluado in vitro por la acumulación intracitoplasmática de gotas de lipídicas (LD) empleando microscopía confocal y exposición de las células a Bodipy 493/503. Así, los astrocitos expuestos a los medios condicionados proveniente de MDM de las 3 condiciones de infección acumularon LD, fenómeno no observado en MDM control sin infectar. En conclusión, la infección de MDM por VIH sería modulada diferencialmente según su inóculo y por la coexistencia del SARS-CoV-2. Esos MDM infectados liberan mediadores solubles capaces de modular la infección de astrocitos por VIH, favoreciendo la anormal acumulación de gotas lipídicas.