Influencia de la deficiencia de aminoácidos sobre el proteoma de hepatocitos. Acción de metionina

RONCHI VIRGINIA P; YEVES ALEJANDRA M; CHISARI ANDREA; CONDE RUBÉN D

Mar del Plata

Congreso; Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2006

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Influencia de la deficiencia de aminoácidos sobre el proteoma de hepatocitos. Acción de metionina Ronchi Viginia, Yeves Alejandra, Chisari Andrea, Conde Rubén Instituto de Investigaciones Biológicas, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad Nacional de Mar del Plata, c.c. 1245, (7600) Mar del Plata, ARGENTINA. Email:pronchi@mdp.edu.ar   Una dieta sin aminoácidos reduce el contenido proteico y modifica el nivel de algunas proteínas citosólicas en el hígado de ratón hembra. El aporte dietario de metionina previene varios de estos cambios. Aunque su patrón proteico exhibe algunas diferencias con el hígado in vivo, los hepatocitos aislados son útiles para examinar la influencia del aporte de aminoácidos sobre el proteoma hepático. El objetivo del presente trabajo fue evaluar mediante electroforesis 1D-SDS-PAGE y 2D-SDS-NEPHGE los patrones de proteínas citosólicas de hepatocitos incubados en medios sin aminoácidos (AAF) y con metionina (AAF+Met). La viabilidad, contenido de proteínas y ARN de las células incubadas durante 2h disminuyeron en AAF (12, 52, y 54%). Mediante 1D-SDS-PAGE se observó que los niveles de proteínas de 133 y 126 kDa aumentan 88 y 176% en AAF, mientras el que otra de 101 kDa disminuye 30% con respecto al control. La presencia de metionina en AAF previene principalmente el cambio de la proteína de 126 kDa. Los citosoles de hepatocitos incubados en AAF exhibieron 217 polipeptidos en 2D-NEPHGE. Respecto del control normal, un 62% de ellos disminuyó y 12% aumentó en magnitud mayor a 1.5 veces. La incubación en AAF+Met aumentó el nivel de 18 polipeptidos y disminuyó el de 39 con respecto al control. Según su Mr y pI, dos de las proteínas modificadas por AAF corresponden a la glutatión S-transferasa GSTM2 y la Acil-coenzima A tioesterasa 1. En conjunto, la respuesta de los hepatocitos aislados a la privación de aminoácidos es similar a la observada in vivo. Los contenidos de varias proteínas vinculadas con el metabolismo energético y estrés oxidativo son controlados por el aporte de aminoácidos. Por lo tanto, el modelo de hepatocitos aislados podría utilizarse para estudiar la regulación de proteínas frente a diferentes situaciones de estrés nutricional. Financiado por CONICET, UNMDP, UNLP. Palabras claves: hepatocitos aislados, deficiencia de aminoácidos, 2D-NEPHGE