Distribución de intermediarios de la síntesis de gangliósidos y glicosiltransferasas en membranas del complejo de Golgi

CRESPO, P.M.; ZURITA, A.R.; MACCIONI H.J.F; DANIOTTI, J.L.

Va. Gral Belgrano, Córdoba, Argentina

Congreso; XIV Jornadas Científicas de la Sociedad de Biología de Córdoba; 2003

Sociedad de Biología de Córdoba

BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR POSTER DISTRIBUCIÓN DE INTERMEDIARIOS DE LA SÍNTESIS DE GANGLIÓSIDOS Y GLICOSILTRANSFERASAS EN MEMBRANAS DEL COMPLEJO DE GOLGI Crespo, Pilar M.; Zurita, Adolfo R. y Daniotti, Jose L. CIQUIBIC, Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba, Córdoba, Argentina. e-mail: pcrespo@dqb.fcq.unc.edu.ar Los microdominios enriquecidos en glicoesfingolípidos (GEM) son dominios especializados de la membrana plasmática resistentes a la solubilización con detergentes, en los cuales se concentran algunos gangliósidos. Aunque se considera que la génesis de GEM ocurre en el complejo de Golgi, donde también ocurre la síntesis de gangliósidos, el mecanismo concerniente a la incorporación de especies de gangliósidos en GEM está aún pobremente esclarecido. En este trabajo, utilizando clones de células CHO-K1 que poseen diferente composición de glicolípidos, comparamos el comportamineto de distintos gangliósidos de membrana plasmática frente a la solubilización con Tritón X-100 frío, con las mismas especies recién sintetizadas en membranas de Golgi. También analizamos si 3 gangliosido-glicosiltransferasas (una sialyl-, una N-acetyl-galactosaminyl- y una galactosyl-transferasa) están incluidas o excluidas de GEM en membranas del Golgi. Nuestros datos muestran que una importante fracción de GM3 de membrana plasmática, y la mayor parte de GD3 y GT3 residen en GEM. Análisis de immunocitoquímica de células que expresan GD3 revelaron que este gangliósido se distribuye en patches de membrana plasmática resistentes a la extracción con detergente frío. Estos patches colocalizan sólo parcialmente con una proteína anclada vía glicosilfosfatidilinositol usada como marcador GEM, indicando una composición heterogénea de GEM en membrana plasmática. En membranas de Golgi no se encontró evidencia de localización en GEM de gangliósido-glycosyltransferasas ni de gangliósidos recién sintetizados. Dado que las mismas especies de gangliósidos aparecen en GEM de membrana plasmática, se concluye que GD3, GT3 y GM3 recién sintetizado in vivo se segregan de las transferasas que les dan origen y luego entran en dominios GEM. Este evento podría haber tenido lugar  inmediatamente después de la síntesis en las cisternas de Golgi, a lo largo de la vía secretaria y/o en la superficie de la célula.