Trypanosoma cruzi induce la activación de inflamasoma NLRP3 en una línea celular de macrófagos murinos

PAROLI, AUGUSTO; AROCENA, ALFREDO; ONOFRIO, LUISINA; PONCE, NICOLÁS; CRESPO, PILAR; CANO, ROXANA; GEA, SUSANA.

Mar del Plata

Congreso; LX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología (SAI); 2012

Sociedad Argentina de Inmunología (SAI)

TRYPANOSOMA CRUZI INDUCE LA ACTIVACIÓN DEL INFLAMASOMA NLRP3 EN UNA LÍNEA CELULAR DE MACRÓFAGOS MURINOS Paroli, Augusto; Arocena, Alfredo; Onofrio, Luisina; Ponce, Nicolás; Crespo, Pilar; Cano, Roxana; Gea, Susana   Los macrófagos son células de la inmunidad innata capaces de detectar patrones moleculares asociados a patógenos (PAMPs) y señales de peligro endógenas (DAMPs) mediante diversos receptores. Además, juegan un papel crucial en la aterogénesis y son capaces de secretar citocinas proinflamatorias. La liberación de IL-1β requiere la activación de caspasa-1 por complejos multiproteicos citosólicos: los inflamasomas, de los cuales el NLRP3 ha sido el más estudiado. Previamente, demostramos una inducción de los transcriptos de NLRP3 y ASC en hígado  y corazón junto con la síntesis de IL-1β por leucocitos hepáticos en un modelo de infección aguda con Trypanosoma cruzi (Tulahuén). Objetivo: Investigar la inducción de NLRP3 por inmunofluorescencia en un modelo de infección in vitro con T. cruzi y en presencia de cristales de colesterol (CC). Se empleó la línea celular de macrófagos J774 en diferentes condiciones de cultivo con 2x105células/pocillo en placa de 24: 1) LPS+ATP (control +); 2) medio completo (control -); 3) Infectado con tripomastigotes (2:1, parásito:célula); 4) LPS+ATP+T. cruzi; 5) CC (500 µg/ml); por triplicado. Se determinó IL-1β en sobrenadantes de cultivo de 6 horas post estímulo por ELISA sándwich y se fijaron las células con paraformaldheído al 4%. Se observó la marca del anticuerpo específico anti-NLRP3 en el citoplasma celular tanto en el control (+) (LPS+ATP), como en las células infectadas con T. cruzi. La marca para NLRP3 fue negativa en citoplasma de macrófagos cultivados con DMEM solamente. En las condiciones experimentales empleadas, no se detectó activación de NLRP3 por estimulación con CC. Los niveles de IL-1β fueron significativamente mayores respecto del control (-) en las células cultivadas con LPS+ATP e infectados con T. cruzi (p<0,05). Conclusión: estos resultados sugieren que el Trypanosoma cruzi activaría al inflamasoma NLRP3 e induciría la liberación de IL-1β en una línea de macrófagos murinos.