EL FACTOR DE CRECIMIENTO DERIVADO DEL EPITELIO (PEDF) Y SUS FRAGMENTOS NEUROTRÓFICOS PROMUEVEN LA SUPERVIVENCIA Y DIFERENCIACIÓN DE NEURONAS DE RETINA

MICHELIS, G.; GERMAN, O.L.; ROTSTEIN, N.; BECERRA, P.; POLITI, L.

Congreso; XII Congreso AIVO 2018; 2018

AIVO

Objetivos: El factor derivado del epitelio pigmentado (PEDF) protege a células progenitoras de retina. Además, el grupo de P Becerra en el NIH demostró que su receptor, el PEDF-R sería una fosfolipasa del tipo A2. Analizamos ahora los efectos del PEDF y sus fragmentos neurotróficos sobre la supervivencia y diferenciación de los fotorreceptores (FR).Métodos: Cultivos puros de FR y neuronas amacrinas de retinas de ratas PN1 se incubaron a día 2 con PEDF o sus fragmentos 17 y 44-mer, o antiangiogénico 34-mer (10 nM); el péptido bloqueante P1 (100 nM), el inhibidor selectivo de PEDF-R, Atglistatin; o vehículo (control). A DIV5 evaluamos la muerte celular por técnicas de TUNEL, Ioduro de Propidio y Annexin V, la funcionalidad mitocondrial con la sonda Mitotracker y el desarrollo de neuritas y expresión de opsina por inmunocitoquímica. Determinamos la presencia del PEDF-R por citoquímica y Western blot y analizamos los cambios en el perfil de mRNA por medio del RT2 Profiler Array.Resultados: Las neuronas expresan el PEDF-R, que se localiza en la membrana celular. El PEDF redujo la apoptosis de los FRs, preservando el potencial de membrana mitocondrial. La citometría de flujo evidenció dos poblaciones, una de estas marcada con Annexin V, la cual fue rescatada con PEDF. En los cultivos control, la opsina mostró una distribución difusa en las membranas celulares, mientras que el PEDF promovió su localización en los procesos apicales de los FR. El PEDF aumentó la longitud axonal en FR y amacrinas. Las preincubaciones con P1 o atglistatin abolieron estos efectos. Los péptidos 17/44-mer mimetizaron los efectos del PEDF sobre la supervivencia y expresión de opsina, mientras que el 34-mer no tuvo efecto. El PEDF modificó los patrones de expresión de mRNA, con los mayores aumentos a nivel del eje TRAF2-NFkB-Bcl2a1, junto con otros como Grb2, Akt1 y los genes involucrados en autofagia ATG5/12.Conclusiones: Estos resultados sugieren que el PEDF activaría mecanismos de supervivencia en los FR y promovería la diferenciación tanto en los FR como en las neuronas amacrinas. Indican también que los fragmentos 17/44-mer serían capaces de activar la supervivencia y diferenciación en los FR, que involucraría al mismo sitio activo del PEDF-R.