MODELIZACIÓN EN SÍLICO DE LA ENZIMA GLICERALDEHÍDO-3-FOSFATO DESHIDROGENASA DEL ECHINOCOCCUS GRANULOSUS S.L.G1 RECONOCIDA POR LOS ANTICUERPOS DE PACIENTES HUMANOS CON EQUINOCOCOSIS QUÍSTICA DE LOCALIZACIÓN HEPÁTICA.

AGUERO F; MAGLIOCO A; PAULINO M; FUCHS A

Jornada; X JORNADAS DE JÓVENES INVESTIGADORES; 2021

La equinococosis quística (EQ) es una zoonosis parasitaria de distribución mundial causada por el estado larvario de Echinococcus granulosus s. l.(Eg) En Argentina, la EQ está difundida en todo en el territorio nacional, con mayor prevalencia en las zonas rurales asociadas a la cría de ovinos y caprinos. Nuestro laboratorio ha desarrollado la línea celular EGPE, a partir de protoescólices de origen bovino (Eg. G1) para el estudios de drogas antiparasitarias y la búsqueda de moléculas con potencial de blanco farmacológico. La Gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) es una enzima constitutiva y su rol principal está en el metabolismo energético celular y también está involucrada en regulación transcripcional y post transcripcional de genes, transporte vesicular y en el mantenimiento de la integridad del ADN. En microorganismos patógenos se ha descripto que GAPDH posee funciones en la interacción y adhesión de microorganismos al huésped. Presenta varias isoformas y se secreta en exosomas. Hemos identificado dos isoformas de GAPDH en las células EGPE: W6UJ19 (338 aminoácidos), proveniente de homogenato de EGPE y W6V1T8 (336 aminoácidos) encontrada en el sobrenadante de colonias quísticas de EGPE cultivadas en agarosa. Ambas isoformas se identificaron por proteómica, luego de haber sido eluídas las proteínas por columnas de afinidad construidas (Sepharosa G) con anticuerpos de suero de pacientes de EQ de localización hepática exclusiva. Presentamos los modelos tridimensionales en sílico de la estructura predicha para ambas accesiones de GAPDH utilizando el servidor Phyre2 con los algoritmos Normal e Intensivo y validados posteriormente por ProSA-web. Se obtuvieron dos modelos para cada accesión con el 100% de confianza: W6UJ19 PhyN (334 Aa modelados), W6UJ19 PhyInt (338 Aa), W6V1T8 PhyN (332 Aa) y W6V1T8 PhyInt (336 Aa). Todos los modelos obtuvieron un z-score dentro del rango esperado en base de datos de proteínas cristalizadas de la misma cantidad de aminoácidos del Protein Data Bank (PDB): -8.36, -8.75, -9.75 y -10.09, respectivamente. Los dos algoritmos identificaron el cristal de GAPDH de Leishmania mexicana (código PDB: 1I32) como mejor templado para la generación de modelos de ambas isoformas. En conclusión inhibidores específicos para las enzimas parasitarias, como en el caso de la Leshmania y el Mycobacterium (Muranetz y col, 2019), serían útiles también como parasiticidas para el E.granulosus, por analogía estructural. Un bloqueo de esta enzima podría significar la desestabilización del parásito induciendo mecanismos de muerte celular.