AS PROTEÍNAS DE CÉLULAS EGPE SON RECONOCIDAS POR SUERO DE PACIENTES CON HIDATIDOSIS.

MAGLIOCO A; MELISA S BARBERY VENTURI; JORGE GENTILE; CLAUDIA HERNANDEZ; FERRULLI, MARIANA; JENSEN O; MARÍA LAURA GERTISER; GABRIELA A CANZIANI; FUCHS A

Jornada; XXX Jornadas Nacionales de Hidatidosis; 2015

Introducción: La tenia de E. granulosus es el agente causal de la hidatidosis, una zoonosismundialmente distribuida. La fuente habitual de antígenos utilizados para el inmunodiagnósticono está estandarizada. La utilización de una fuente más estandarizada permitiría mejorar eldiagnóstico serológico. En nuestro laboratorio, se ha establecido una línea celular a partir deprotoescólices bovinos (células EGPE). En estas células, el antígeno B se detectó medianteinmunohistoquímica y DCO1 se detectó por PCR. Objetivo: identificar si las proteínas obtenidasa partir de células EGPE pueden ser reconocidas exclusivamente por suero de pacientes.Materiales y Métodos: Las células EGPE se cultivaron en presencia de medio completo M199o con 1% de suero fetal bovino hasta los 20 días, para la extracción de proteínas (EP) o laobtención de medio condicionado (MC), respectivamente. Para la EP se utilizó CHAPS 0,5%durante 2 horas y luego se realizaron 4 ciclos de congelación-descongelación. Las muestras desuero de pacientes se obtuvieron de la zona de Tandil, Buenos Aires, con el consentimiento delos pacientes. Se analizaron por western blot (15% SDS-PAGE) muestras de suero de 13pacientes con hidatidosis (diagnóstico serológico positivo: 8/13 pacientes) y muestras depacientes con otras enfermedades infecciosas (control). Se utilizaron 18 µg de EP, 11 µg de MCy 1/125 de suero. En paralelo se analizó la reactividad de los sueros frente a extracto proteicode quistes hidatídicos frescos obtenidos de ovinos. Se utilizó un anticuerpo anti-humano IgG (Fcespecífico) conjugado a fosfatasa alcalina y se reveló con BCIP/NBT. Resultados: el uso delsobrenadante permitió la detección de 12/13 pacientes (bandas exclusivas comprendidas en losrangos 26 a 30 KDa, 47 a 53 KDa, 55 a 59 KDa, 74 a 79 KDa, 80-81 KDa y 90 a 95 KDa),mientras que el EP de 7 días permitió la detección de 10/13 pacientes (bandas exclusivas: 49 a58 KDa, 64 a 67 KDa, 71 a 78 KDa y 80 a 88 KDa) y el EP de 20 días permitió la detección de11/13 pacientes (bandas exclusivas: 48 a 53 KDa, 60 a 65 KDa, 71 a 78 KDa, 80 a 88 KDa y 91a 97 KDa). El uso de protoescolices ovinos permitió detectar 10/13 pacientes. Conclusión: lascélulas EGPE podrían utilizarse como fuente de material antigénico estandarizado para eldiagnóstico de la hidatidosis y podría indicar la viabilidad del quiste.Este trabajo se realiza con subsidio de Agencia de Ciencia y Tecnología, Argentina, ANR 800