ProteInas antigenicas semipurificadas desde una lInea celular de Echicnococus granulosus G1, EGPE, son reconocidas por sueros de pacientes infectados

FUCHS A; MAGLIOCO A; PERALTA ME; JENSEN O; MARÍA LAURA GERTISER; JORGE GENTILE; CLAUDIA HERNANDEZ; GABRIELA A CANZIANI

Congreso; XXX REUNION ANUAL SOCIEDAD ARGENTINA DE PROTOZOOLOGIA; 2018

Introducci´on: En nuestro laboratorio tenemos la l´ınea celular EGPE (In vitro-animal 2010). Anteriormentehemos comunicado (SAI 2017, SAI 2016) que el extracto proteico de estas c´elulas es reconocido por el 100 %del suero proveniente de pacientes con hidatidosis c´ıstica y por el suero de ovinos infectados con E.granulosuspor el m´etodo de Western blot (WB). Objetivo: Identificar las prote´ınas del extracto celular involucradas enel reconocimiento inmunol´ogico. Materiales y M´etodos: Se realizaron los extractos proteicos de las c´elulasEGPE, luego de 7 d´ıas de cultivo y del l´ıquido y arenilla hidat´ıdica (LH) provenientes de metacestodes G1con 8 mM CHAPS, 10 mM Tris-HCl, pH 8; 2mM EDTA, 0,1 % β-ME, 1/ 100 inhibidor de proteasa. Lasprote´ınas provenientes de las c´elulas se concentraron utilizando el concentrador 3K (Pierce) y se diluyeronen buffer fosfato de sodio 50 mM pH 7,4. Se eluyeron por una columna de Sephacryl 200 HR (1,56 x 86 cm).Los picos de prote´ınas se leyeron a 215 nm. Los picos encontrados fueron utilizados para la realizaci´on deWB y las fracciones positivas, reconocidas por los sueros de los pacientes , fueron concentradas y diluidasen PBS. Las prote´ınas obtenidas del LH fueron concentradas de la misma forma. Se procedi´o a sembrar enplacas de 96 wells de alta afinidad para prote´ınas 1 ug prot del LH, de los picos proteicos obtenidos por lacolumna y del homogenato total de c´elulas EGPE. El ELISA indirecto se realiz´o utilizando los 21 sueros depacientes y sus 21 controles, anteriormente utilizados en los trabajos ya informados. El 2 anticuerpo fue unanti IgG anti Fc (Sigma) humano marcado con HRP. Los controles de t´ecnica se realizaron sin el agregadodel suero y con el 2 anticuerpo, las muestras se leyeron a 450 nm. Resultados: los sueros de los pacientesdieron diferencias significativas p