CARACTERIZACIÓN BIOINFORMÁTICA DE LA ENZIMA GLICERALDEHÍDO3-FOSFATO DESHIDROGENASA DEL ECHINOCOCCUS GRANULOSUS S.L.G1 RECONOCIDA POR LOS ANTICUERPOS DE PACIENTES HUMANOS CON EQUINOCOCOSIS QUÍSTICA DE LOCALIZACIÓN HEPÁTICA.

AGUERO F; MAGLIOCO A; JUAREZ VALDEZ A; PAULINO M; FUCHS A

Jornada; XII Jornada de jóvenes investigadores de Veterinaria; 2023

La equinococosis quística (EQ) es una zoonosis parasitaria mundialmente distribuida,causada por Echinococcus granulosus s. l. En Argentina, la EQ está presente en todo el territorio nacional, con mayor prevalencia en las zonas rurales asociadas a la cría de ganado. Nuestro laboratorio ha desarrollado la línea celular EGPE, a partir de protoescólices G1 de origen bovino para el estudio de drogas antiparasitarias y la búsqueda de blancos farmacológicos. La gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) es una enzima constitutiva con localización intracitoplasmática, nuclear y extracelular y se asocia al metabolismo energético celular pero también a otras numerosas funciones como apoptosis, regulación de la expresión génica, interacción célula-célula, mantenimiento de la integridad del ADN. En algunos patógenos se ha descripto que GAPDH cumple un rol en la interacción con el huésped, pero aún no ha sido descripta su función en E. granulosus. Utilizando proteínas de homogenato de EGPE y de sobrenadante de colonias quísticas de EGPE cultivadas en agarosa, identificamos por espectrometría de masas dos isoenzimas de GAPDH reconocidas por anticuerpos de pacientes con EQ de localización hepática: W6UJ19 (338 aminoácidos, en homogenato) y W6V1T8 (336 aminoácidos, en sobrenadante). Ambas proteínas presentan una identidad de secuencia del 74 % y sus estructuras superpuestas presentan un RMSD de 5.61, 3.69, 5.15 y 5.46 entre las cadenas que las componen. El objetivo de este trabajo fue analizar las diferencias entre estas dos isoenzimas. Se analizó la similitud de estas isoenzimas con GAPDH de otras especies utilizando Blastp. Se analizaron los dominios utilizando InterPro y la presencia de motivos lineales cortos (SLiMs, short linear motifs) utilizando ELM sin restringir compartimento celular. Se encontró que las GAPDH de mayor similitud pertenecen a Echinococcus multilocularis, Hymenolepis microstoma, y Taenia solium con identidades de 75-99% con W6UJ19 y de 85-97% con W6V1T8. No se encontraron diferencias en el tipo y número de dominios que presentan W6UJ19 y W6V1T8, pero si en la presencia de motivos lineales cortos que pueden participar en interacciones proteína-proteína o ser sitios de modificaciones postraduccionales. Al analizar los motivos lineales observamos que se diferencian en 12 motivos: 3 exclusivos de W6UJ19 y 9 de W6V1T8. W6UJ19 presenta 2 sitios de fosforilación y el motivo de unión a 14-3-3; la unión de proteínas del patógeno a la proteína 14-3-3 del huésped ha sido descripta en otras infecciones como Pseudomonas aeruginosa y Chlamydia trachomatis. W6V1T8 presenta 6 motivos asociados a funcionalidad en núcleo o citoplasma, 2 motivos de fosforilación y un motivo de unión a glucosaminoglicanos; este último podría permitir la adherencia de GAPDH al tejido del huésped. En conclusión, las dos GAPDH podrían tener distinto rol en la interacción con el huésped. Se necesitan más estudios para poder dilucidar el rol particular de cada isoenzima.