INVESTIGADORES
WUNDERLIN Daniel Alberto
congresos y reuniones científicas
Título:
IDENTIFICACIÓN DE ÁCIDOS FENÓLICOS CON CARACTERÍSTICAS ANTIOXIDANTES A TRAVÉS DE HPLC-Q-TOF
Autor/es:
PODIO, N.S.; CHEMINET G.; LINGUA, M.; DI PAOLA, R.; BARONI, M.V.; WUNDERLIN D.A.
Lugar:
Los Cocos
Reunión:
Congreso; I° Congreso Argentino de Espectrometria de Masas.; 2012
Institución organizadora:
SAEM
Resumen:
Estudios epidemiológicos sugieren que el consumo de frutas, verduras y
cereales puede ayudar a la prevención de enfermedades cardiovasculares,
diabetes y ciertas formas de cáncer. Este efecto beneficioso en la salud humana
se atribuye a la presencia de fibras dietarias y a metabolitos secundarios
bioactivos, dentro de los cuales se encuentran los ácidos fenólicos. Estos
últimos están ampliamente distribuidos en el reino vegetal y han ganado mucha
atención debido a su capacidad antioxidante y habilidad de eliminar radicales
libres. Existen 2 clases de ácidos fenólicos: los hidroxicinámicos (HC) e
hidroxibenzoicos (HB). Los HC son los más abundantes y se encuentran en frutas,
vegetales, café, vino y aceite de oliva. Se caracterizan por su estructura C6-C3,
y en su mayoría se encuentran esterificados con ácidos orgánicos, azúcares y
lípidos. Los HB están presentes principalmente en frutas, poseen una estructura
C6-C1 y pueden encontrarse en su forma libre o
glicosilados. Es importante tener acceso a métodos rápidos y seguros para el
análisis e identificación de estos compuestos fenólicos naturales en todas sus
formas. Una de las técnicas analíticas más importantes para esto es la
cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) acoplada a un espectrómetro de
masas. Esta técnica permite separar, identificar y cuantificar simultáneamente
los compuestos fenólicos, sin necesidad de una derivatización previa de los
compuestos en estudio. En el presente trabajo se describe la metodología desarrollada
para la identificación de ácidos fenólicos en distintas matrices alimenticias (trigo,
tomate, uva, vino, yerba y café), utilizando un HPLC con detector de arreglo de
diodos (Agilent Technologies) acoplado a una fuente de ionización por
electrospray (ESI) y a un espectrómetro de masas, equipado con un analizador
cuadrupolo y tiempo de vuelo (microTof-Q II, Bruker). Los ácidos fenólicos
fueron separados a través de una columna de fase reversa Phenomenex Luna C18 (250
mm x 4.60 mm d.i., 5 mm) a 35°C, utilizando un
gradiente de solventes (A: ácido
fórmico 0,5% v/v; B: ácido fórmico 0,5% v/v en metanol) a un flujo de 0.4 mL min-1.
Los cromatogramas fueron monitoreados a 280 nm (HB) y a 320 nm (HC). Las
condiciones de trabajo de la fuente de ionización fueron: modo de ionización
negativo; voltaje del capilar, 4500V; presión del nebulizador, 3.5 Bar; flujo
del gas de secado, 7.5 L/min; temperatura de secado, 180°C. Nitrógeno y Argón
fueron utilizados como gas de nebulización y gas de colisión, respectivamente. Los
espectros de MS/MS fueron obtenidos por CID en modo automático. En total fueron
identificados 51 compuestos derivados de ácidos fenólicos, algunos en su forma
libre y en forma de dímeros y trímeros. También se encontraron ácidos fenólicos
unidos a azúcares, al aminoácido triptófano o esterificados con ácidos tales
como el quínico o shikímico.
Los ácidos clorogénico, cumárico y ferúlico fueron identificados por
comparación del tiempo de retención (min), espectro UV y espectro de masas de
estándares comerciales. El resto de los compuestos encontrados fueron
identificados a través de la determinación de masa exacta, espectro UV,
espectro de masas, espectro de MS2 y comparación con bibliografía. Los
espectros UV obtenidos fueron característicos de ácidos hidroxibenzoicos e
hidroxicinámicos. Cada compuesto encontrado presentó una fragmentación característica,
los compuestos unidos a ácido quínico presentaron un ion hijo de m/z 191
correspondiente al mismo. Los dímeros de ácidos fenólicos y los ácidos
glicosilados mostraron un ion hijo de m/z igual al ácido fenólico que les dio
origen, los trímeros por su parte presentaron un ion hijo de m/z igual al ácido
fenólico dimerizado.
La metodología desarrollada en este trabajo permitió la separación,
caracterización e identificación de 51 compuestos fenólicos derivados de ácidos
benozoico y cinámico en distintos
alimentos, demostrando las ventajas que presentan la utilización de un
cromatógrafo de alta resolución acoplado a un espectrómetro de masas.