ELISA INDIRECTO PARA EL DIAGNOSTICO DE LA PIROPLASMOSIS EQUINA

ASENZO G; WILKOWSKY S; BARRANDEGUY, M; BENITEZ D; FLORIN-CHRISTENSEN M

Mar del Plata, Argentina

Congreso; -XVI Reunión Científico Técnica de la AAVLD (Asoc. Arg. de Vet. De Lab. de Diagn.) Mar del Plata, Argentina.; 2006

Asoc. Arg. de Vet. De Lab. de Diagn (AAVLD)

Introducción:   Para el tránsito internacional de equinos se requiere una certificación oficial de que el animal está libre de piroplasmosis. La piroplasmosis equina o babesiosis es una enfermedad de caballos mulas, asnos y cebras producida por protozoos y transmitida por garrapatas. Los agentes etiológicos son parásitos intraeritrocíticos llamados Theileria equi y Babesia caballi. El diagnóstico se basa en la detección de anticuerpos séricos específicos. Los métodos de diagnósotico disponibles son inmunofluorescencia,  fijación de complemento y  ELISA competitivo. En nuestro país hay dos laboratorios autorizados a realizar el diagnóstico de piroplasmosis y los reactivos necesarios son importados desde Estados Unidos. Esta situación plantea la necesidad de contar con reactivos y métodos de diagnóstico alternativos.   En este trabajo, se desarrolló un ELISA indirecto basado en el antígeno de superficie EMA-1 de Theileria equi. Materiales y Métodos:   Se amplificó por PCR el marco abierto de lectura del gen ema-1 de T. equi.  Este producto se insertó en el vector de expresión pBAD thio TOPO (Invitrogen), con el que se transformaron células E. coli competentes. La proteína recombinante obtenida se purificó por cromatografía de afinidad con una resina de niquel-agarosa. Luego de demostrar con un inmunoblots que era reconocida por un suero equino positivo para T. equi, la proteína recombinante fue usada para desarrollar el ELISA. Para la puesta a punto del mismo se utilizaron distintos tiempos y temperaturas de incubación, distintos bloqueantes, distintas concentraciones de detergente. Para la determinación del punto de corte, se utilizaron 90 sueros de animales de zonas libres de garrapatas y se utilizó como criterio de positividad una densidad óptica mayor a tres desvios standard de la densidad óptica promedio de estos sueros analizados. Resultados:   Con este ELISA Se analizaron 43 muestras de suero de equinos de dos establecimientos del Noreste Argentino, El 82,76% (n=29) de los sueros del departamento Misión  Laishi, Formosa y el 7,14% (n=14) en Yuquerí, Corrientes resultaron positivos.  y se obtuvieron valores preliminares de positividad del 82,76 % en el Dto. Misión Laishi, Formosa (n=29) y de 7,14% en Yuqueri, Corrientes. (n=14). Discusión:  Los resultados obtenidos, si bien preliminares, son concordantes con los comunicados previamente por otros autores b, lo que es alentador respecto del desempeño del ensayo desarrollado. Próximamente, se analizarán mayor número de muestras comparativamente con inmunofluorescencia lo que permitirá sacar conclusiones definitivas sobre la sensibilidad y especificidad de este ensayo. Esta diferencia de positividad entre estas dos regiones (mayor en Formosa con respecto a Corrientes), si bien son preliminares, son valores esperados de acuerdo a trabajos anterioresb y a la latitud geográfica; lo que sería un buen indicio del buen funcionamiento del ensayo. En etapas posteriores se analizarán más sueros tanto con este ELISA, como por inmunofluorescencia y se realizará un test de congruencia para comparar los resultados obtenidos con ambos métodos. Bibliografía: a Manual de la Organización Internacional de Sanidad Animal, (www.oie.int), capítulo 2.5.6., “Equine Piroplamosis”. b “Babesiosis Clínica en Equinos de Cerrillos, Salta, Argentina” Aguirre, D.H.; Cafrune, M.M.; Rada, M. Y Torioni de Echaide, S.. RIA, 33 (3): 123-133 Diciembre 2004, INTA, Argentina.