Evaluación del desempeño diagnóstico de una nueva qPCR para la confirmación de casos agudos y crónicos de babesiosis bovina por B. bovis

MONTENEGRO, VALERIA NOELY; VALENZANO MAGALI NICOLE; PEREZ A; LOPEZ ARIAS, LUDMILA; GUILLEMI, ELIANA C.; ZIMMER P; SARMIENTO, NÉSTOR FABIÁN; PERTILE C.; TRANGONI, MARCOS; FARBER, MARISA D.; WILKOWSKY SILVINA ELIZABETH,

La Plata

Congreso; XXXIV REUNIÓN ANUAL DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE PROTOZOOLOGÍA; 2023

Sociedad Argentina de Protozoología

El diagnóstico directo de la babesiosis y anaplasmosis bovina se realiza habitualmente por observación microscópica de un frotis teñido con Giemsa. Sin embargo, las infecciones crónicas de estos hemoparásitos cursan con parasitemias extremadamente bajas (< 0.2 %) y este método posee muy baja sensibilidad. Por su parte, la PCR si bien es altamente sensible, no permite discriminar si la presencia del patógeno es la causa del cuadro clínico, debido a la existencia de animales inmunizados con la vacuna viva o portadores crónicos. En este trabajo desarrollamos una qPCR basada en el gen rap-1 para la cuantificación de parasitemias por B. bovis. Para determinar la sensibilidad analítica, se construyó una curva estándar a partir del fragmento de rap-1 clonado en un plásmido y se realizó la correlación con una curva de parasitemia conocida. El límite de detección de la qPCR fue de 3,15 copias/ul de sangre que resultó equivalente a una parasitemia de 0.0001%. Para la validación clínica de la qPCR se analizaron muestras de bovinos de zonas enzoóticas para garrapatas de las Pcias. de Corrientes (N=75) y de Formosa (N=65) así como 51 muestras de la Pcia. de Bs. As. (zona libre del vector). Todas las muestras se analizaron en paralelo por PCR como “gold standard”. En las muestras positivas por qPCR observamos diferencias estadísticamente significativas (test Tukey-Kramer p1000 copias génicas por reacción) y 51 animales sin signos de la enfermedad en los que se determinaron entre 45 y 999 copias génicas por reacción, a su vez 71 animales resultaron negativos de acuerdo al límite de detección de la técnica. En resumen, la qPCR desarrollada aquí permite la detección molecular de B. bovis y su cuantificación, para así relacionar los cuadros clínicos con la parasitemia absoluta e inferir el curso de la enfermedad que permitan establecer las medidas de control adecuadas.