Invasión y retirada: caracterización de nuevas proteínas que utiliza Babesia en su batalla contra el huésped

MONTENEGRO, VALERIA NOELY; PAOLETTA, MARTINA SOLEDAD; WILKOWSKY SILVINA ELIZABETH,

Congreso; XI Congreso de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2022

Sociedad Argentina de Protozoología

Babesia bovis y B. bigemina son parásitos apicomplejos transmitidos por garrapatas que afectan el ganado bovino en zonas tropicales y subtropicales del mundo. La identificación y caracterización de proteínas involucradas en la invasión y egreso del parásito al glóbulo rojo representan el primer paso para el diseño racional de vacunas más seguras que reemplacen el uso actual de cepas atenuadas.En nuestro grupo identificamos 2 familias de proteínas con roles clave en otros miembros de Apicomplexa pero que aún no habían sido descriptas en las dos especies de Babesia. A través de una búsqueda en el genoma de B. bovis, identificamos una familia de 6 proteínas similares a la perforina (BboPLP1-6) implicadas en la formación de poros y el daño a los glóbulos rojos. El miembro con mayor expresión en el estadio intraeritrocitario y con expresión diferencial en cepas virulentas resultó ser BboPLP1, cuyo dominio lítico predicho in silico posee una alta homología con el componente C6 del complemento humano. Utilizando el dominio lítico de BboPLP1 recombinante y ensayos de hemólisis confirmamos la función lítica de esta proteína. BboPLP1 posee además epitopes B reconocidos por anticuerpos de bovinos infectados. También generamos una cepa de B. bovis knock-out para Bboplp1 la cual tuvo una menor tasa de crecimiento y un fenotipo peculiar de múltiples parásitos dentro de un solo eritrocito lo que sugiere que la falta de PLP1 tiene un impacto negativo en la multiplicación y/o salida del parásito.Por su parte, la familia de proteínas TRAP se ha descrito como un posible candidato a vacuna en varios parásitos apicomplejos incluyendo Plasmodium por su rol en las etapas iniciales de la invasión parasitaria. Mediante una búsqueda bioinformática en el genoma de Babesia bigemina identificamos 3 miembros de la familia TRAP (BbiTRAP-1-3). Todas son proteínas transmembrana de tipo 1 que contienen los dominios típicos tipo A de von Willebrand, trombospondina tipo 1 y citoplásmicos C-terminales. La estructura predicha de BbiTRAP-1 también contiene un sitio de adhesión dependiente de iones metálicos para la interacción con la célula hospedadora Llamativamente la secuencia nucleotídica de BbiTRAP-1 contiene un número variable de unidades repetitivas en tándem que resultó útil como marcador molecular entre distintas cepas. Los análisis por Western blot e inmunofluorescencia indirecta confirmaron la expresión de BbiTRAP-1 en estadios sanguíneos. Los anticuerpos bovinos anti-BbiTRAP-1 recombinante fueron capaces de inhibir significativamente la invasión de merozoitos in vitro, lo que demuestra la presencia de epitopes B sensibles a la neutralización en dicha proteína.En síntesis, a través de una combinación de análisis bioinformáticos, inmunológicos y funcionales hemos caracterizado nuevas proteínas en B. bovis y B. bigemina con roles diversos en la interacción con el bovino y con potencial para ser incluidas en futuras vacunas candidatas.