NUEVA FUNCIÓN DE LA PROTEÍNA ADAPTADORA AP-2 EN LA DIFERENCIACIÓN A QUISTES EN G. LAMBLIA

FELIZIANI C; RIVERO MR; ROPOLO AS; TOUZ MC

Rio IV

Jornada; XXIV JORNADAS CIENTÍFICAS SOCIEDAD DE BIOLOGÍA DE CÓRDOBA; 2021

SOCIEDAD DE BIOLOGÍA DE CÓRDOBA

Las células pueden intercambiar material e información con su entorno a través de receptores presentes en la superficie celular. Éstos participan en procesos como la absorción de nutrientes y las vías de señalización, donde la endocitosis es un mecanismo clave para regular ambos eventos. Durante el crecimiento, el parásito G. lamblia adquiere colesterol del medio extracelular a través de la endocitosis mediada por receptores de lipoproteínas, LDL y quilomicrones. Mientras que, durante el enquistamiento, hay una disminución en el colesterol disponible que desencadena la diferenciación de los trofozoítos a quistes. En este proyecto abordamos la participación de la maquinaria endocítica en el proceso de diferenciación celular de G. lamblia a su forma resistente, el quiste. Trofozoítos transgénicos ds-gµ2 (expresan ARN doble cadena de 100 pb del gen que codifica para gµ2 cuando es inducido con tetraciclina) fueron inducidas a enquistar en ausencia o presencia de tetraciclina dando a lugar a células ds-gµ2 y ds-gµ2+, observamos que la cantidad relativa de vesículas específicas del enquistamiento (ESVs) y quistes, aumentaba significativamente en células ds-gµ2+, comparada con ds-gµ2 y los controles wb1267 (trofozoítos salvajes) y wb1267+ (trofozoítos salvajes + tetraciclina). Mediante Real Time PCR encontramos un aumento en la expresión de los genes específicos de enquistamiento (cwp1-3 y myb2) principalmente para cwp1-3. Aunque se observó la formación de quistes en todas las células testeadas, en las ds-gµ2+ éstos denotaban características de quistes incompletos que fueron incapaces de sobrevivir en agua durante la noche. Posteriormente, analizamos la localización de gµ2 junto con la formación de las ESVs y la secreción de CWPs por inmufluorescencia directa y microscopía confocal en trofozoítos salvajes wb1267 y wb1267+ y los transgénicos ds-gµ2 y ds-gµ2+. Observamos a las 10 horas post inducción del enquistamiento, en los trofozoítos wb1267, wb1267+ y ds-gµ2, algunas ESVs conteniendo CWP1 y a gµ2 en las PVs dispuestas alrededor de la cara interna de la membrana plasmática. Alrededor de la hora 18, las PVs conteniendo gµ2 comenzaron a rodear a las ESVs. A las 24 horas, las ESVs se fisionaron formando vesículas pequeñas donde colocalizan CWP1 y gµ2. Cuando la expresión de gµ2 fue inhibida, no se observaron alteraciones de la morfología de las PVs ni de las ESVs. Sin embargo, sí se encontró bloqueada la formación de las vesículas pequeñas y la formación de la pared del quiste. Finalmente, a las 48 hs de enquistamiento, se observó la presencia de vesículas conteniendo CWP1 en trofozoítos destruidos inviables. Nuestros resultados apoyan la teoría de que gµ2 se encuentra involucrada en el transporte de CWPs a la membrana plasmática para la formación de la pared del quiste. Aun así, la participación de gµ2 durante el enquistamiento puede ser también importante en la endocitosis del material proveniente de la pared del quiste durante el reciclado de membrana después de la liberación de las CWPs.