INVESTIGADORES
SPITZMAUL Guillermo Federico
congresos y reuniones científicas
Título:
IDENTIFICACIÓN DE RESIDUOS DEL SEGMENTO TRANSMEMBRANAL M1 DEL RECEPTOR NICOTINICO QUE AFECTAN SU ACTIVACIÓN
Autor/es:
CORRADI, JEREMIAS; SPITZMAUL, GUILLERMO; DE ROSA, MARIA J.; BOUZAT, CECILIA
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas; 2004
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Neuroquímica (SAN); Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica (SAIB); Sociedad Argentina de Biofísica (SAB), Sociedad Argentina de Biología (SAB), Sociedad Argentina de Fisiología (SAF), Sociedad Argentina de Farmacología Exp
Resumen:
El receptor nicotínico (AChR)
muscular es un pentámero con una composición alfa2-beta-epsilon-delta. Cada
subunidad posee un dominio N-terminal, cuatro segmentos transmembranales
(M1-M4), y un dominio C-terminal. Nuestro objetivo fue identificar residuos del
segmento M1 que participan en la activación del AChR. Para ello combinamos
mutagénesis dirigida y construcción de subunidades quiméricas con registros de
patch-clamp. Demostramos que la posición 15? afecta significativamente la
cinética de activación. Para las subunidades alfa, epsilon y delta hay una
relación inversa entre la eficacia de activación del canal y el volumen del
residuo sustituyente en 15?, en cambio para beta no existe correlación entre la
eficacia de activación y las propiedad fisicoquímicas del residuo. Según la
estructura atómica la posición F15? de la subunidad alfa interaccionaría con el
residuo L11? en M2. Para determinar cómo esta interacción modifica
la cinética intercambiamos los aminoácidos entre ambas posiciones. La
probabilidad de apertura aumentó dos veces en M1 F15?L, disminuyó 6 veces
en M2L11?F y 1.8 veces en la doble mutante. Esta reversión del efecto
observado sugiere que la interacción entre ambas posiciones es más importante
que las propiedades de los aminoácidos individuales que las ocupan. También
construimos un AChR muscular quimérico reemplazando el segmento M1 de la
subunidad alfa por el de alfa7. Este AChR mostró aperturas 10 veces más largas
que el control y una menor constante de disociación del agonista. Para
identificar los residuos implicados en dichos cambios realizamos quimeras
parciales, y observamos que las posiciones 6?, 8? y 9? son las responsables de
los principales cambios cinéticos. Nuestros resultados revelan que el segmento
M1 tiene un rol funcional, que las posiciones 6?, 8?, 9? y 15? contribuyen a la
activación del canal, y que las bases estructurales de la contribución para la
posición 15? no se conservan entre subunidades.