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La participación del citoesqueleto (CE) celular en la multiplicación del virus Junín (JUNV) ha sido demostrada mediante el empleo de distintas drogas desestabilizantes de microtúbulos, filamentos intermedios y microfilamentos que fueron capaces, asimismo, de reducir los niveles de infectividad producida en cultivos celulares infectados con este agente. Dichos ensayos, realizados durante la etapa aguda de la infección, se complementan en este trabajo a través del estudio de la participación de los microfilamentos de actina en la multiplicación de JUNV durante la etapa persistente de la infección en células Vero.Para ello se utilizó una línea de células Vero persistentemente infectada con JUNV y clonada, denominada H8. En estas células se observó síntesis y acumulación de la nucleoproteína viral (N, 64 kDa) y de sus productos de degradación de 40-43 y 25 kDa pero no así de la principal glicoproteína de envoltura (G1), siendo en consecuencia cultivos no virogénicos. La presencia de N se correlacionó con la resistencia a la sobreinfección de H8 frente al desafío con virus homólogo. En función de las propiedades desestabilizantes de la citochalacina D (CD) sobre los microfilamentos de actina se decidió la utilización de la misma como herramienta para estudiar la participación del CE durante este tipo de infección. En primer lugar se analizó la citotoxicidad de esta droga en células H8 y Vero no infectadas e infectadas en forma aguda. Se comprobó que mientras las células H8 presentaron una viabilidad mayor al 95% para una concentración de CD de 10 µM, las células Vero y Vero infectadas presentaron valores de 70 y 50%, respectivamente. Este comportamiento se vió reflejado en la expresión del CE cuando los cultivos celulares tratados con CD y marcados con faloidina (Ph-FITC) fueron analizados mediante la técnica de inmunofluorescencia directa. Mientras en las células Vero y Vero infectadas en forma aguda, el tratamiento con CD 2 µM causó la pérdida del patrón filamentoso característico de los microfilamentos produciendo un fenómeno de agregación, el mismo tratamiento en H8 no alteró por completo la integridad de los microfilamentos pudiendo observarse su presencia en la periferia celular. Asimismo se constató una alteración morfológica más evidente en los cultivos de células Vero en comparación con H8. A continuación se analizó el efecto de la CD sobre el patrón de expresión citoplasmático granular típico de N observándose que éste no se modificó cuando se utilizaron concentraciones de 2 a 10 µM de la droga.Finalmente se realizó una doble marcación para microfilamentos y N, con Ph-FITC y un mAb anti-N revelado con un Ac anti-Ratón TRITC, respectivamente. Para H8, se observó en el caso de las células positivas para N, la existencia de tres patrones de CE de actina: filamentoso en periferia celular, filamentoso de longitud reducida o no filamentoso. A su vez la células Vero infectadas y tratadas a las 72 horas post-infección (p.i.) presentaron en el caso de las células positivas para N, un CE de tipo filamentoso y distribuido por toda la célula como en el caso de células no infectadas, así como de tipo no filamentoso. El incremento en la despolimerización de los microfilamentos en este último caso podría estar correlacionada con una mayor intensidad del efecto citopático presentado por aquellas células infectadas desde el inicio. Conclusiones Las células persistentemente infectadas con JUNV resultaron más resistentes a la acción despolimerizante de la CD en comparación con células Vero y Vero infectadas en forma aguda. La CD no afecta el patrón de expresión de N en ninguno de los tipos de infecciones analizadas. En las células persistentemente infectadas parecería existir una correlación negativa entre la expresión de N y la visualización de los microfilamentos.

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