Regeneración de neuronas con características de fotorreceptoras en subcultivos neurogliales de retina

SIMON V.; DE LOS SANTOS EB; ROTSTEIN N.P.; POLITI L.E.

Los Cocos, Cordoba

Congreso; XXII Reunión Anual de la SAN; 2007

Sociedad Argentina de Investigacion en Neurociencias

Regeneración de neuronas con características de fotorreceptoras en subcultivos neurogliales de retina Simón M. Victoria, De los Santos Beatriz, Rotstein Nora, Politi Luis E. Instituto de Investigaciones Bioquímicas, UNS-CONICET, Bahía Blanca, Argentina.   En múltiples enfermedades neurodegenerativas de la retina la progresiva e irreversible pérdida de la visión se origina en la muerte por apoptosis de las neuronas fotorreceptoras. Una estrategia propuesta para tratar estas enfermedades es recuperar las neuronas perdidas, utilizando stem cells. Las células gliales de Müller han sido propuestas como stem cells en la retina, pero no se ha establecido cómo regular su proliferación y cómo inducir su diferenciación en neuronas. Previamente determinamos que el factor trófico derivado de la glia (GDNF) e insulina promueven la proliferación glial in vitro, y que las células gliales preservan la capacidad proliferativa de neuroblastos en co-cultivo, que se pierde rápidamente en cultivos neuronales puros. Para establecer si las células de Müller se diferencian como neuronas, cocultivos neurogliales de 7-9 días se repicaron y sembraron en medio con 10% de suero. Luego de 7-9 días fueron repicados nuevamente para obtener cultivos terciarios. Se analizó la expresión de NeuN, marcador neuronal, y Crx y Rho4D2, marcadores de fotorreceptores. En los subcultivos se observaron células que expresaron NeuN y Crx, algunas con la característica morfología neuronal. El agregado de insulina promovió la expresión de NeuN y el de ácido docosahexaenoico (DHA) la de Crx. Además, en los cultivos terciarios se observaron neuronas que expresaron opsina. En contraste, cultivos secundarios de células gliales puras no presentaron células NeuN- o Crx-positivas, y cultivos secundarios de neuronas puras degeneraron rápidamente. Estos resultados sugieren que las células gliales podrían generar o mantener un pool de neuroblastos, capaces de expresar marcadores neuronales y de fotorreceptores, y que insulina y DHA pueden promover la diferenciación neuronal y como fotorreceptores, respectivamente.