La señalización vía receptores de membrana de la esfingosina-1-fosfato es necesaria para el ensamblado de adhesiones focales en el epitelio pigmentario de retina.

TORLACHI C.; GUTIÉRREZ JOFRÉ G.; ROTSTEIN N.P.; SIMÓN M.V.

Córdoba

Congreso; XIV Reunión anual de AIVO; 2023

AIVO

La señalización vía receptores de membrana de la esfingosina-1-fosfato es necesaria para el ensamblado de adhesiones focales en el epitelio pigmentario de retina. Camila Torlaschi, Gabriela Gutiérrez Jofré, Nora P. Rotstein, M. Victoria Simón. Instituto de Investigaciones Bioquímicas, Depto. de Biología, Bioquímica y Farmacia, Universidad Nacional del Sur-CONICET, 8000 Bahía Blanca, Buenos Aires, Argentina. camilatorlaschi@gmail.comObjetivos: La disrupción de la barrera formada por el epitelio pigmentario de la retina (EPR) caracteriza a muchas retinopatías proliferativas. Demostramos que un esfingolípido bioactivo, la esfingosina-1-fosfato (S1P) promueve la migración y respuesta inflamatoria en estas células. Investigamos ahora si S1P regula la formación de adhesiones focales (FA), esenciales para formar dicha barrera. Materiales y métodos: tratamos a cultivos de la línea celular de EPR, ARPE-19, con PF543, inhibidor de esfingosina quinasa 1 (SphK1), con S1P o ceramida-1-fosfato (C1P), o con W146 y JTE013, antagonistas para los receptores de S1P S1P1 y S1P2, respectivamente. Analizamos migración por el ensayo de la herida, y la morfología celular y expresión de paxilina, proteína de ensamblado de las FA, por inmunocitoquímica.Resultados: el PF543 disminuyó la migración celular en cultivos confluentes. En cultivos 50% confluentes, PF543 indujo la retracción celular, con 34±2% (p>0,01) de células elongadas, ausentes en los controles. La relación largo/ancho celular aumentó de 1,6 en los controles a 5,3 con PF543. El agregado de S1P, y no de C1P, restauró la morfología celular, reduciendo las células elongadas a 8±1.4%. W146 y JTE013 bloquearon parcialmente la recuperación de la morfología inducida por S1P. El PF543 provocó la desaparición de los acúmulos punteados de paxilina presentes en los controles, y el agregado de S1P los restauró.Conclusión: la señalización de adentro hacia afuera de S1P, a través de S1P1 y S1P2 está involucrada en la preservación de la morfología de las células de EPR y el ensamblaje de las FA.Resumen en inglésSphingosine-1-phosphate signaling through membrane receptors is required for the assembly of focal adhesions in retina pigment epithelial cellsCamila Torlaschi, Gabriela Gutiérrez Jofré, Nora P. Rotstein, M. Victoria Simón. Instituto de Investigaciones Bioquímicas, Depto. de Biología, Bioquímica y Farmacia, Universidad Nacional del Sur-CONICET, 8000 Bahía Blanca, Buenos Aires, Argentina. camilatorlaschi@gmail.comPurpose: The disruption of the barrier formed by retina pigment epithelium (RPE) cells characterizes many proliferative retinopathies. We have demonstrated that a bioactive sphingolipid, sphingosine-1-phosphate (S1P) promotes migration and an inflammatory response in RPE cells. We have now investigated whether S1P regulates the formation of focal adhesions (FA), essential for forming this barrier.Methods: human RPE cell line (ARPE-19) cultures were treated with PF543, a sphingosine kinase 1 (SphK1) inhibitor, with S1P or ceramide-1-phosphate (C1P), or with W146 and JTE013, antagonists for S1P receptors S1P1 and S1P2, respectively. Cell migration was analyzed by the scratch wound assay, and cell morphology and expression of paxillin, a FA scaffold protein, by immunocytochemistry. Results: PF543 markedly decreased cell migration in confluent cultures. In 50% confluent cultures PF543 promoted cell retraction; highly elongated cells, absent in controls, augmented to 34±2% (p>0.01), their cell length/width ratio increasing from 1.6 in controls to 5.3. Addition of S1P, but not of C1P, restored cell morphology, reducing elongated cells to 8±1.4%. W146 and JTE-013 partially blocked S1P restoration of cell morphology. The spot-like paxillin clusters present in the cell periphery in controls, disappeared in PF543-treated cells and were restored after S1P addition. Conclusion: inside-out signaling by S1P, through S1P1 and S1P2, is involved in the preservation of RPE cell morphology and in the assembly of FA.