Bordetella pertussis modulates host defense genes

VALDEZ, HUGO; OVIEDO, JUAN MARCOS; RODRIGUEZ, MARIA EUGENIA

Dublin

Simposio; 10th International Symposium on Bordetella; 2013

Bordetella International Society

Trabajos previos de nuestro grupo demuestran que B. pertussis (Bp), agente causante de la tos convulsa, es capaz de sobrevivir y duplicar en macrófagos humanos. El objetivo de este trabajo fue evaluar si la citoquina IFN-γ, crítica en la eliminación de patógenos intracelulares, es capáz de evitar la infección intracelular. Para ello, monocitos humanos aislados de sangre periférica fueron diferenciados a macrófagos, incubados con o sin IFN-γ, e infectados con Bp en presencia o ausencia IFN-γ. El nivel de fagocitosis, evaluado por doble tinción fluorescente, fue significativamente mayor en los macrófagos estimulados con IFN-γ (74,0% ±2,7 vs.50,4% ±4,2). La sobrevida intracelular se evaluó mediante ensayos de protección a polimixina B a diferentes tiempos post-infección (1, 24, 48 y 72h). Paralelamente se empleó marcación vital (por FISH) y tinción de compartimientos acídicos con Lysotracker para estudiar la localización intracelular de las bacterias vivas utilizando microscopía confocal. Los resultados revelaron que durante la primera hora de infección la taza de muerte de Bp es significativamente mayor en los macrófagos estimulados con IFN-γ. Sin embargo, luego de 48 hs, aún en presencia de IFN-γ, se observó un incremento en el recuento de viables, compatible con replicación intracelular. Se pudo determinar que las bacterias vivas se localizan en compartimentos no acídicos. Estos resultados sugieren que Bp es capaz de subvertir el efecto del INF sobre la célula hospedadora. Para evaluar esta posibilidad se determinó por citometría de flujo el nivel de expresión del MHC-II (HLA-DR) a lo largo de la infección intracelular en presencia o ausencia de IFN-γ. Se encontró que Bp inhibe el aumento de expresión de MHCII en respuesta a IFN-γ. La inhibición tuvo su máximo a las 48hs (p