Clonado, expresión, purificación y análisis de alérgenos de soja.

CANDREVA ANGELA; CURCIARELLO, RENATA; PETRUCCELLI, SILVANA; DOCENA, GUILLERMO HORACIO

Ciudad de Rosario, pcia. de Santa Fé - Acta de congreso VII Simposio Nacional de Biotecnología, REDBIO 2009

Congreso; REDBIO 2009 VII Simposio Nacional de Biotecnología y II Congreso Internacional; 2009

REDBIO-FAO

. Se conocen más de 16 proteínas de soja que muestran reactividad frente a inmunoglobulinas E humanas, cuya identidad como alergenos no ha sido aún demostrada. Es importante la identificación y caracterización de los alérgenos relevantes en soja para entender los mecanismos moleculares de alergia a soja, que permitan crear herramientas de diagnóstico y terapias para dicha enfermedad. El objetivo de este trabajo fue clonar y expresar en bacterias algunos de los posibles alergenos de soja con el fin de analizar, en primera instancia, su reconocimiento por sueros de pacientes alérgicos de la población argentina. A partir de una biblioteca de cDNA de semillas inmaduras de soja se amplificaron por PCR los genes codificantes para Gly m Bd 30K (p34), Gly m Bd 28K (p28), Gly m conglicinina alfa,  deleciones de alfa y Gly m glicinina G4. Estos genes fueron clonados empleando el sistema Gateway (Invitrogen), cuyos vectores permiten la fusión a la maltose-binding protein (MBP) y a un Tag de histidinas, para facilitar la purificación de las proteínas recombinantes. Los plásmidos fueron introducidos en diferentes cepas de E. coli, optimizándose las condiciones de inducción y purificación. Se comprobó la reactividad cruzada de Gly m conglicinina alfa y sus deleciones con proteínas de leche bovina mediante Western-blots utilizando sueros policlonales  anti-leche vacuna obtenidos en cabra y conejo, y anticuerpos monoclonales específicos de caseínas bovinas. Mediante ELISA indirecto con sueros de pacientes argentinos alérgicos a soja se determinó la reactividad Ig E específica de las proteínas de soja recombinantes p34 y p28.