Caracterización de la reactividad cruzada entre leche bovina y soja mediante técnicas de inmunoproteómica: mapeo de los epitopes compartidos por MALDI-TOF MS

CANDREVA ANGELA; TREJO, SEBASTIAN; FERRER-NAVARRO MARIO; AVILES FRANCISCO; DOCENA, GUILLERMO; PETRUCCELLI, SILVANA

Tucuman

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2011

Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología

Por su alta exposición en la población, la leche bovina (LV) y la soja se han convertido en importantes alergenos alimentarios. Las fórmulas a base de proteínas de soja (PS) se utilizan con frecuencia como sustitutos de LV en pacientes alérgicos (ALV) con edades superiores a los 6 meses. Sin embargo, existe una intolerancia clínica en pacientes sensibilizados únicamente a LV que puede explicarse por reactividad cruzada (RC) entre los sistemas proteicos. Nuestro grupo ha descripto como alergenos de RC las caseínas bovinas (CB) y las fracciones 7S y 11S de soja. El objetivo del rpesente trabajo fue estudiar la reactividad de proteínas  de soja que podrían compartir epitopes lineales con CB, empleando anticuerpos monoclonales específicos de las distintas CB (mAb-CB) 1D5, 4C3 y 3B5. Se empleó MALDI-TOF y espectrometría de masa (MALDI-TOF MS) para identificar los epitopes reconocidos por los mAbs-CB. Las CB puras fueron digeridas enzimáticamente (Tripsina-GluC), los péptidos obtenidos fueron separados por RP-HPLC y luego analizados por dot blot utilizando los mAb-CB. Los péptidos reactivos se caracterizaron por MALDI-TOF MS. En paralelo, los mAb-CB fueron inmovilizados en partículas magnéticas y posteriormente se incubaron con la mezcla de los péptidos obtenida por proteólisis. Se compararon por MALDI-TOF los perfiles correspondientes a los péptidos unidos por los mAbs-CB, con respecto a los no reconocidos. Se identificaron 2 péptidos de alfa S1-caseína (aas34-45, 106-115) y 1 de beta-caseína (aas56-84) reconocidos por los mAbs-CB. Estos mAbs reconocen también las PS: subunidades alfa, alfa prima y beta  de la beta conglicinina, P34 y A4A5B3. Empleando herramientas bioinformáticas se identificaron zonas de alta identidad secuencial entre estas proteínas y los péptidos de CB que podrían explicar la RC descripta. En conclusión, se identificaron 3 epitopes potenciales de caseínas que muestran RC con alergenos de soja. La metodología aplicada significa un importante avance en la caracterización molecular de la reactividad cruzada entre alergenos de soja y leche bovina, y podría ser aplicada a la predicción de nuevas reactividades cruzadas